發(fā)布時(shí)間：2020-05-13 11:45

【摘要】：心血管疾病的發(fā)病率逐漸增高,在2010年,美國心臟學(xué)會統(tǒng)計(jì),出院確診的患者中,心血管疾病患者占第一位達(dá)到5.8百萬,遠(yuǎn)高于排在第十位的腫瘤患者的1.6百萬。這些患者中很多需要進(jìn)行球囊擴(kuò)張,支架植入及行轉(zhuǎn)流手術(shù)。正因?yàn)閯用}疾病的高發(fā)病率,所以大量的實(shí)驗(yàn)研究了植入動脈循環(huán)系統(tǒng)的支架,靜脈移植物,人工血管材料的愈合過程和機(jī)制。新生內(nèi)膜的增生是一個(gè)不可避免的病理生理過程,造成移植物管腔的狹窄,更嚴(yán)重的情況造成管腔堵塞而造成移植物失敗,對患者造成嚴(yán)重的痛苦�，F(xiàn)在隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展,人們正在尋找各種方法抑制移植物內(nèi)膜的增生,包括如藥物洗脫的支架及人工移植物,并在動物實(shí)驗(yàn)及臨床試驗(yàn)中取得了良好的效果。隨著納米科技的發(fā)展,在動物試驗(yàn)中,應(yīng)用納米科技來抑制新生內(nèi)膜增生在動物試驗(yàn)中也取得了較好的效果。與之相反,在靜脈系統(tǒng),需要進(jìn)行支架植入及進(jìn)行轉(zhuǎn)流手術(shù)相對較少。但在某些嚴(yán)重的下腔靜脈損傷,某些腫瘤侵犯下腔靜脈,有必要進(jìn)行下腔靜脈的修復(fù)或是行轉(zhuǎn)流手術(shù)。因?yàn)殪o脈系統(tǒng)是一個(gè)低流速的系統(tǒng),血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)較大,并且為了避免靜脈系統(tǒng)的狹窄,所以了解靜脈系統(tǒng)新生內(nèi)膜的形成并抑制靜脈新生內(nèi)膜增生極為重要。牛心包補(bǔ)片在血管外科手術(shù)中現(xiàn)在已經(jīng)廣泛應(yīng)用,但在靜脈系統(tǒng)中的愈合機(jī)制還不清楚;納米顆粒雷帕霉素能否粘附在牛心包補(bǔ)片上也不清楚;這種粘附了納米顆粒雷帕霉素的牛心包補(bǔ)片能否抑制新生內(nèi)膜的增生,是否會對愈合過程造成負(fù)性影響還未得到探索。所以我們建立了一個(gè)大鼠的下腔靜脈靜脈切開模型,行牛心包補(bǔ)片修補(bǔ)術(shù),研究靜脈系統(tǒng)新生內(nèi)膜形成的過程及變化;并制作納米顆粒雷帕霉素,研究其是否能成功的粘附在牛心包補(bǔ)片上;然后把粘附了納米顆粒雷帕霉素的補(bǔ)片修補(bǔ)大鼠的下腔靜脈,了解能否抑制靜脈新生內(nèi)膜增生及研究其機(jī)制。目的:1.了解牛心包補(bǔ)片修補(bǔ)大鼠下腔靜脈的愈合過程及機(jī)制;2.檢驗(yàn)納米顆粒雷帕霉素能否成功的粘附在牛心包補(bǔ)片上;3.探索粘附了納米顆粒雷帕霉素的牛心包補(bǔ)片能否有效抑制新生內(nèi)膜增生。方法:選取6-8周的成年雄性Wistar大鼠(250-350g),共91只,修補(bǔ)下腔靜脈組32只大鼠,植入皮下組12只大鼠,補(bǔ)片在第1,3,7,30天取出,了解下腔靜脈補(bǔ)片修補(bǔ)術(shù)的愈合機(jī)制及過程。納米顆粒雷帕霉素組16只大鼠,納米顆�？瞻讓φ战M16只,用于納米顆粒rhodamine的15只。補(bǔ)片在第7,30天取出;運(yùn)用HE,免疫組化,免疫熒光和Western blot方法,了解納米顆粒雷帕霉素能否有效抑制靜脈新生內(nèi)膜增生。結(jié)果:1.在第7天,在補(bǔ)片管腔面出現(xiàn)新生內(nèi)膜;與第7天相比,在第30天新生內(nèi)膜逐漸增厚(p0.0001)。2.與第7天相比,第30天的內(nèi)皮化比例較高(p=0.0048);內(nèi)膜中的平滑肌的平均密度沒有明顯變化(p=0.9224);間充質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少(p=0.001),巨噬細(xì)胞(p=0.0001)和白細(xì)胞比例減少(p0.0001)。內(nèi)皮祖細(xì)胞,平滑肌祖細(xì)胞和靜脈祖細(xì)胞參與了新生內(nèi)膜的形成。3.平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表達(dá)VCAM,ICAM和CD29等細(xì)胞識別和黏附因子。4.與第7天相比,第30天處于增生狀態(tài)的細(xì)胞數(shù)量顯著下降(p0.0001);處于凋亡狀態(tài)的細(xì)胞比例沒有明顯變化(p=0.7383)。5.在第天和第30天,新生內(nèi)膜的內(nèi)皮細(xì)胞,平滑肌細(xì)胞表達(dá)Eph-B4。與第7天相比,第30天新生內(nèi)膜表達(dá)大量膠原纖維(p=0.0001),但不表達(dá)彈力纖維。在第7天和第30天內(nèi)膜中少量細(xì)胞表達(dá)Ephrin-B2,但內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)Ephrin-B2。6.與第7天相比,在第30天,MMP-2,MMP-3和MMP-4的表達(dá)減少(p=0.0011,p=0.0074,p=0.043)。7.電鏡圖片顯示納米顆粒粘附在牛心包補(bǔ)片的膠原纖維素上,雷帕霉素的釋放可以維持大約3周的時(shí)間。8.納米顆粒雷帕霉素組和納米顆�？瞻讓φ战M相比,在第7天,內(nèi)膜和外膜的厚度顯著降低(p=0.0010,p=0.0010),但納米顆粒空白對照組和對照組沒有明顯差異(p=0.0787)。在第30天,內(nèi)膜和外膜的厚度顯著降低(p=0.0046,p=0.0026),但納米顆粒空白對照組和對照組沒有明顯差異(p=0.5921)。納米顆粒雷帕霉素組和納米顆粒空白對照組的重新內(nèi)皮化比率沒有明顯差異(p=0.5914,p=0.8025)。9.在納米顆粒雷帕霉素組,與納米顆粒空白對照組相比,在第7天和第30天,有較少的CD68陽性細(xì)胞(p=0.0028,p=0.0248),平滑肌細(xì)胞平均密度顯著降低(p=0.0103,p=0.0093)。在納米顆粒雷帕霉素組,與納米顆粒空白對照組相比,在第7天有較少的細(xì)胞處于增生狀態(tài)(p=0.0039),并且有較少的平滑肌細(xì)胞處于增生狀態(tài)(p=0.0018);在第30天,處于增生狀態(tài)的細(xì)胞比例沒有明顯差異(p=0.1883)。在第7天和第30天,處于凋亡狀態(tài)的細(xì)胞沒有明顯差異(p=0.7338,p=0.7118)。10.納米顆粒Rhodamine主要在肝腎代謝,其它組織中較少。納米顆粒Rhodamine在牛心包補(bǔ)片上24小時(shí)后還能檢測到。結(jié)論:1.在牛心包補(bǔ)片修補(bǔ)大鼠下腔靜脈切開術(shù)中,不同種類的成熟細(xì)胞和祖細(xì)胞參與了靜脈新生內(nèi)膜的形成;不同細(xì)胞的比例在不同時(shí)間有不同的變化;在不同時(shí)間,處于增生狀態(tài)的細(xì)胞比例也不相同。不同種類細(xì)胞所表達(dá)的蛋白也處于變化中。2.不同的細(xì)胞間分子介導(dǎo)了細(xì)胞間的識別和粘附。3.在靜脈新生內(nèi)膜形成過程中,新生內(nèi)膜得到了一個(gè)類似正常靜脈內(nèi)膜的結(jié)構(gòu)和分子標(biāo)志。4.納米顆粒雷帕霉素可以成功的粘附在牛心包補(bǔ)片上。5.粘附了納米顆粒了雷帕霉素的牛心包補(bǔ)片可以顯著抑制靜脈新生內(nèi)膜的增生。
【圖文】：

在第30天，有較少的陽性細(xì)胞（圖6A，，第一列）；與第7天相比，在新生內(nèi)膜中，第30天有顯著減少的巨噬細(xì)胞（p=0.0001，圖6B,第一個(gè)條狀圖）。在第7天和第30天，在新生內(nèi)膜中都可發(fā)現(xiàn)有CD45陽性細(xì)胞(圖6A,第二列), 與第7天相比，在新生內(nèi)膜中，第30天有顯著減少的白細(xì)胞 (p<0.0001，第二個(gè)條狀圖)。

在第7天和第30天，在新生的內(nèi)膜表面，都有CD31陽性的細(xì)胞表達(dá)(圖20A)；內(nèi)皮細(xì)胞的連續(xù)性在這兩組中間，在第7天和第30天沒有顯著性的差異 (p=0.5914, p=0.8025) (圖20B)。 在第7天和第30天，納米顆粒和納米雷帕霉素并不影響內(nèi)皮祖細(xì)胞（圖20C,上排）；靜脈內(nèi)皮祖細(xì)胞（圖20C,中排）；新生內(nèi)膜成熟內(nèi)皮細(xì)胞的靜脈特征（圖20C，下排）。3.2 納米顆粒黏附的牛心包補(bǔ)片不影響內(nèi)膜的內(nèi)皮化
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R363

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本文編號：2661905