【摘要】：(1)研究目的鼻咽癌是一種原發(fā)于鼻咽部的常見(jiàn)頭頸部惡性腫瘤,廣東等地區(qū)尤為高發(fā)。由于發(fā)病部位隱蔽,早期患者難以及時(shí)發(fā)現(xiàn),鼻咽部有大量的淋巴引流,所以大多數(shù)患者首先表現(xiàn)為頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。近幾十年來(lái),雖然治療方法的不斷改進(jìn),但Ⅳ期患者5年生存率僅約65%。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或個(gè)體異質(zhì)性耐藥的原因?qū)е卤茄拾┤杂屑s10%-20%的復(fù)發(fā)率。即使在同步放化療后,大部分T3或T4期患者的總生存率依舊相對(duì)較低。原發(fā)和繼發(fā)性的耐藥限制了治療藥物的選擇。然而,關(guān)于復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移性鼻咽癌具體是通過(guò)何種機(jī)制產(chǎn)生的耐藥目前仍然不是很清楚。因此,明確鼻咽癌的耐藥機(jī)制將有助于制定合適的治療方案,從而提高患者的生存率和改善生活質(zhì)量。(2)研究方法采用順鉑劑量逐步遞加法分別誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞HNE-1和CNE-2,建立了兩株鼻咽癌順鉑耐藥細(xì)胞系(HNE-1/DDP和CNE-2/DDP),通過(guò)皮下種瘤法建立了荷兩種瘤裸鼠模型,并通過(guò)細(xì)胞生物學(xué)的方法研究了耐藥細(xì)胞增殖、遷移、凋亡、克隆等生物學(xué)特征。在此基礎(chǔ)上分別對(duì)耐藥細(xì)胞系和親本細(xì)胞系進(jìn)行了mRNA測(cè)序,并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行了生物信息分析,篩選出幾個(gè)與順鉑耐藥高度相關(guān)的通路和基因。通過(guò)在親代細(xì)胞系中過(guò)表達(dá),在耐藥細(xì)胞系中沉默顯著差異表達(dá)基因(DEGs),體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了鼻咽癌順鉑耐藥發(fā)生高度相關(guān)的基因,并初步探討了其在耐藥形成機(jī)制中可能的作用。(3)研究結(jié)果成功誘導(dǎo)建立的鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE-1/DDP和CNE-2/DDP對(duì)順鉑耐藥指數(shù)(RI)分別為12.02和16.02,細(xì)胞凋亡減少,但遷移、克隆、增殖等能力無(wú)明顯改變。HNE-1實(shí)驗(yàn)組共發(fā)現(xiàn)15403組差異表達(dá)基因,其中948組表現(xiàn)出顯著差異(458組為過(guò)表達(dá)差異表達(dá)基因)。我們發(fā)現(xiàn)在所有顯著差異表達(dá)基因中有9組差異表達(dá)基因與經(jīng)典的鉑類耐藥通路相關(guān),其中有3組差異表達(dá)基因(ATM,IAP-1,IAP-2)也出現(xiàn)在本次研究的生信分析結(jié)果的前5大差異表達(dá)通路中。而其中IAP-1擁有最高的log2比值(log2比值,4.22;概率,0.95)。經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,耐藥細(xì)胞系中IAP-1表達(dá)升高引起順鉑在樣本中的半數(shù)致死量(IC50)升高,細(xì)胞凋亡減少,細(xì)胞增殖、克隆和遷移能力下降。此外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明高表達(dá)的IAP-1減緩了腫瘤生長(zhǎng)速度,但也降低了腫瘤對(duì)順鉑的敏感性,減弱了藥物的療效。(4)研究結(jié)論體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,表達(dá)升高的IAP-1在鼻咽癌順鉑耐藥中發(fā)揮重要作用,且其生物學(xué)功能的改變與臨床數(shù)據(jù)具有一致性。結(jié)合開(kāi)放數(shù)據(jù)源的分析結(jié)果,表達(dá)升高的IAP-1與較差的5年存活率、更高的復(fù)發(fā)率和更高的腫瘤組織細(xì)胞分型相關(guān)�？傊�,IAP-1表達(dá)升高與順鉑化療反應(yīng)較差和不良預(yù)后相關(guān),提示IAP-1可以作為一個(gè)新的鼻咽癌預(yù)后指標(biāo),并且可能是一個(gè)潛在的可以改善順鉑化療敏感性的治療靶點(diǎn)。
【圖文】：

逑９５％邋ＣＩ：－４１．４９邋ｔｏ－１３．１７）。此外，我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)劃痕實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能逡逑力，其差異結(jié)果顯示沒(méi)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖３－１Ｆ，，Ｇ）（ＨＮＥ－ｌｖｓＨＮＥ－ｌ／ＤＤＰ逡逑Ｐ值＝０？１０（＞０．０５）；ＣＮＥ－２ｖｓＣＮＥ－２／ＤＤＰＰ值＝０．７０（＞０？０５））。逡逑綜上所述，與親代細(xì)胞系相比，耐藥的鼻咽癌細(xì)胞系凋亡率降低，對(duì)順鉑逡逑的ＩＣ５０值升高，其他生物學(xué)功能無(wú)顯著差異。我們想知道這兩株耐藥鼻咽癌細(xì)逡逑胞系在體內(nèi)的生物學(xué)功能變化是否與體外的一致或有差異，所以我們進(jìn)行了下逡逑一步體內(nèi)實(shí)驗(yàn)來(lái)加以驗(yàn)證。逡逑表３－１不同鼻咽癌細(xì)胞耐藥指數(shù)逡逑ＩＣ５０／0ｉｇ／ｍｌ）邐耐藥指數(shù)邐ＩＣ５０／0ｉｇ／ｍｌ）邐耐藥指數(shù)逡逑藥物名稱邐ＨＮＥ－ｌ／Ｄ邋Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邐ＣＮＥ－２／Ｄ邋Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ逡逑ＨＮＥ－１邐ＣＮＥ－２逡逑ＤＰ邐Ｉｎｄｅｘ，邋ＲＩ邐ＤＰ邐Ｉｎｄｅｘ，邋ＲＩ逡逑順鉑邐０．５９４邐７．０８邐１２．０２邐０．４５３邐２１．３４１邐１６．０２逡逑紫杉醇邐０．１６邐０．１６１邐１．０１邐０．０７９邐０．５２２邐６．６１逡逑五氟尿嘧啶邐０．５３９邐０．５５邐１．０２邐０．７２８邐０．９３３邐１．２８逡逑表３－２不同鼻咽癌細(xì)胞耐藥穩(wěn)定性逡逑ＩＣ５０／（ｎｇ／ｍｌ）邐耐藥指數(shù)邐ＩＣ５０／（ｆｉｇ／ｍｌ）逡逑邐邋邐邋耐藥指數(shù)逡逑時(shí)間點(diǎn)邐Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ逡逑ＨＮＥ－１邋ＨＮＥ－ｌ／ＤＤＰ邐ＣＮＥ－２邋ＣＮＥ－２／ＤＤＰ邋Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋Ｉｎｄｅｘ，邋ＲＩ逡逑Ｉｎｄｅｘ，邋ＲＩ逡逑建株

相似（Ｐ邋值＝０．１８７３邋（＞０．０５），邋９５％邋ＣＩ：邋－６０．００邋？１３．０９）（圖邋３－２Ｄ），差異無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)逡逑意義。這些結(jié)果說(shuō)明即使在體內(nèi)，耐藥的鼻咽癌細(xì)胞系也表現(xiàn)出了較強(qiáng)的順鉑逡逑耐受性。如圖３－２所示，ＨＮＥ－１／ＤＤＰ細(xì)胞系在體內(nèi)雖然生長(zhǎng)較緩慢，但其對(duì)順逡逑鉑的耐受性較強(qiáng)。兩組小鼠的體重變化在治療前后均無(wú)顯著差異（治療前Ｐ值逡逑＝０．２３１８邋（＞０．０５），９５％邋ＣＩ：邋－３．４１７邋？１．４８４；治療后邋Ｐ邋值二０．９４４７邋（＞０．０５），９５％邋ＣＩ：逡逑－１．７９８？１．８６４。上述結(jié)果表明，ＨＮＥ－１／ＤＤＰ細(xì)胞系在體內(nèi)對(duì)順鈾也表現(xiàn)出了較逡逑強(qiáng)的抵抗性。但鼻咽癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥的具體發(fā)生機(jī)制我們?nèi)匀徊皇呛芮宄ｅ义弦虼�，我們下一步進(jìn)行了一個(gè)高通量的測(cè)序分析來(lái)研究這個(gè)問(wèn)題。逡逑２４逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.63;R-332

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1 廖維婷;陳文勇;;鼻咽癌相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J];中醫(yī)耳鼻喉科學(xué)研究;2011年02期

2 邱前輝;;鼻咽癌首選放療? 不一定[J];老同志之友;2019年13期

3 ;鼻咽癌標(biāo)志物臨床應(yīng)用專家共識(shí)[J];中國(guó)癌癥防治雜志;2019年03期

4 黎騁;鄭裕明;郭俊宇;馬麗萍;陸愛(ài)英;湯敏中;吳惠惠;蔡永林;;鼻咽癌組織中多聚免疫球蛋白受體的表達(dá)及意義[J];山東醫(yī)藥;2015年46期

5 葉浩昕;范紹

本文編號(hào)：2659660