【摘要】：【背景】HBV是我國當前流行最為廣泛、危害性最嚴重的疾病之一。全國估計約1億人為慢性HBV感染,占全世界慢性HBV感染者的1/3。酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)是一種常見的慢性肝臟疾病,主要由長期過量飲酒所致,其疾病譜包括酒精性脂肪性肝病(Alcoholic fatty liver disease),酒精性脂肪性肝炎(Alcoholic steatohepatitis,AH),以及AH相關的肝纖維化、酒精性肝硬化以及肝癌。近年來,隨著人們飲食習慣的改變以及社會生活水平的進步,我國酒精類飲料的產(chǎn)量及消耗快速增長,酒精性肝病的發(fā)病率亦逐年攀升。值得關注的是,我國已經(jīng)屬于飲酒人群逐年激增的HBV高發(fā)區(qū)。大部分酒精性肝病患者為酒精性脂肪肝,大部分乙型肝炎患者為無癥狀攜帶者,兩者均無明顯肝功能異常及臨床癥狀,若未行專科體檢,難以發(fā)現(xiàn),因此“隱匿性”強,較易為患者自身忽視。慢性飲酒合并HBV長期共存的潛在危害性尚未能引起廣泛足夠重視,缺乏統(tǒng)計學數(shù)據(jù),尚缺乏其疾病作用機制研究。肝臟是機體重要的代謝器官,參與糖、脂、蛋白質等重要物質的代謝過程。膽固醇是維持機體生理功能的重要物質,其主要代謝過程也在肝臟中進行。膽固醇代謝紊亂可導致多種疾病的發(fā)生,而酒精性脂肪肝合并HBV復制對膽固醇代謝的影響尚不明確。本文通過建立一種酒精性脂肪肝合并HBV復制的小鼠模型,探討其對膽固醇代謝的影響及可能的機制�！痉椒ā客ㄟ^高壓尾靜脈注射pGEM-4Z1.3HBV質粒到周齡6周的雄性FVB/Ncrl小鼠體內,同時酒精飲食干預6周,建立酒精性脂肪肝合并HBV復制的小鼠模型。觀察小鼠體重動態(tài)變化、肝臟組織學變化、血清乙肝e抗原(Hepatitis B e antigen,HBeAg)、谷丙轉氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉氨酶(Aspartate aminotansferase,AST)、甘油三酯(Triglyceride,TG)的變化,同時檢測血清總膽固醇(Total cholesterol,TC)、高低密度脂蛋白以及肝臟膽固醇水平的改變,進而分析膽固醇合成相關分子,例如固醇調節(jié)元件結合蛋白1(Sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP-1)、固醇調節(jié)元件結合蛋白2(Sterol regulatory element-binding protein 2,SREBP-2)、3-羥基-3-甲基戊二酸還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGCR)的變化情況,以及膽固醇攝取相關分子,如低密度脂蛋白受體(Low density lipoprotein receptor,LDLR)、枯草溶菌霉素轉化酶9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type9)和膽固醇降解相關分子膽固醇7α羥化酶(Cholesterol 7 alpha-hydroxylase,CYP-7α)、固醇27羥化酶(Sterol 27-hydroxylase,CYP-27A1)以及膽固醇逆向轉運及酯化水解通路的改變。同時構建真核表達載體pCDH-HBx、pCDH-HBs以及pCDH-HBc(依次編碼乙肝病毒蛋白HBx、HBs和HBc),pCDH-HBx、pCDH-HBs、pCDH-HBc及pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP空載質粒轉染HepG2細胞,乙醇共刺激,檢測上述膽固醇代謝相關分子表達情況�！窘Y果】該小鼠模型體現(xiàn)了肝內HBV復制以及酒精性脂肪肝的病理特征。肝臟膽固醇水平在慢性飲酒合并HBV復制組中顯著增高。參與膽固醇合成的重要分子SREBP-2和HMGCR在合并組中顯著上調,而負責清除血清中低密度脂蛋白的LDLR的表達被其抑制分子PCSK9的上調所抑制,其水平呈下調趨勢。參與膽固醇降解的關鍵酶CYP-7α的表達在合并組中也明顯減少。而慢性飲酒合并HBV持續(xù)復制對膽固醇的逆向轉運及酯化水解無明顯影響。HepG2細胞中HBc蛋白過表達合并乙醇共刺激顯著上調SREBP-2和HMGCR水平,并且明顯抑制LDL的攝取及CYP-7α的表達。【結論】慢性飲酒合并HBV復制導致膽固醇在肝臟的蓄積,包括通過上調SREBP-2和HMGCR的表達增強膽固醇的合成,抑制CYP-7α的表達,減弱膽固醇的降解。同時上調PCSK9從而抑制LDLR的表達,減少肝臟對低密度脂蛋白的攝取,導致血清LDL清除障礙。另外,HBc蛋白可能在其中發(fā)揮重要作用。
【圖文】：

小鼠血清HBeAg的表達水平

小鼠肝組織HBcAg的表達（免疫組織化學染色，，400×），→所示為HBcAg陽性表達
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R575;R512.62;R-332

【參考文獻】

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1 Min Li;Qi Wang;Shun-Ai Liu;Jin-Qian Zhang;Wei Ju;Min Quan;Sheng-Hu Feng;Jin-Ling Dong;Ping Gao;Jun Cheng;;MicroRNA-185-5p mediates regulation of SREBP2 expression by hepatitis C virus core protein[J];World Journal of Gastroenterology;2015年15期

2 李娜;易學瑞;袁有成;張欣蕊;孔祥平;;酒精對C57背景HBV轉基因小鼠肝臟損傷的作用[J];華南國防醫(yī)學雜志;2013年04期

3 Ying-Ju Li;Ping Zhu;Yu Liang;Wei-Guo Yin;Jian-Hua Xiao;;Hepatitis B virus induces expression of cholesterol metabolism-related genes via TLR2 in HepG2 cells[J];World Journal of Gastroenterology;2013年14期

4 郭峗婧;曹進;;ABCA1和ABCG1在膽固醇逆轉運中作用的研究進展[J];國外醫(yī)學(醫(yī)學地理分冊);2012年03期

5 王瑞;羅俊生;關寧;霍小川;;膽固醇酯水解酶與缺血性腦血管病的關系[J];解剖科學進展;2010年04期

6 Sebastian Mueller;Gunda Millonig;Helmut K Seitz;;Alcoholic liver disease and hepatitis C:A frequently underestimated combination[J];World Journal of Gastroenterology;2009年28期

7 孟曉丹;向國卿;賀小虎;王炳元;;肝硬化病因及臨床特點分析178例[J];世界華人消化雜志;2008年17期

8 沈振斌;秦新裕;童賽雄;鎖濤;;ABCG5和ABCG8在肝細胞膽固醇轉運中的作用[J];中華肝膽外科雜志;2005年10期

9 ;Maintaining cholesterol homeostasis: Sterol regulatory element-binding proteins[J];World Journal of Gastroenterology;2004年21期

本文編號：2626954