【摘要】：目的:研究人原代臍靜脈內(nèi)皮細胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被登革熱2型病毒(Dengue virus 2,DENV-2)感染后,與單核細胞誘導培養(yǎng)的人巨噬細胞(Macrophages,M?)共培養(yǎng),觀察對兩種細胞分別產(chǎn)生主要炎性因子的影響。方法:密度梯度離心法從人體外周血濃縮白細胞中分離單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),貼壁得到單核細胞,通過巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)刺激,流式細胞術檢測CD14~+CD11b~+細胞純度,得到M?。DENV-2感染HUVECs,Real-time PCR檢測HUVECs細胞內(nèi)病毒NS1 mRNA表達量變化。HUVECs被DENV-2感染后,通過Transwell法與M?共培養(yǎng),對照組用磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate S1P)1型特異性受體激動劑CYM-5442預處理24h去除藥物后感染病毒。Real-time PCR分別檢測HUVECs產(chǎn)生的IL-6、IL-8 mRNA和M?產(chǎn)生的IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1βmRNA的逆轉(zhuǎn)錄水平;ELISA雙抗體夾心法檢測培養(yǎng)上清中上述細胞因子的表達。結(jié)果:HUVECs被感染DENV-2后,細胞內(nèi)NS1基因轉(zhuǎn)錄水平逐漸上升,24h時達峰值(2.66±0.53,P0.05)后下降。流式細胞術檢測M?純度為89.16±2.07%。HUVECs被DENV-2感染后IL-6、IL-8 mRNA轉(zhuǎn)錄水平均上調(diào),24h mRNA轉(zhuǎn)錄量達到峰值;IL-6為16.1±0.17,IL-8為29.76±0.58。未感染組轉(zhuǎn)錄水平IL-6為1.46±0.67,IL-8為1.6±0.54。M?被感染后IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1βmRNA表達量均有明顯上升,在24h mRNA IL-6表達量為45.82±3.72,IL-8為52.34±1.69(12h),TNF-α為28.94±1.75,IL-1β為30.96±1.44;未感染組轉(zhuǎn)錄水平IL-6為1.16±0.22,IL-8為1.15±0.21,TNF-α為1.11±0.09,IL-1β為1.47±0.31。HUVEC與M?共培養(yǎng)后上述細胞因子在各時間點的轉(zhuǎn)錄水平有所下降,依然明顯高于未感染對照組。CYM-5442預處理后,共培養(yǎng)組感染的HUVEC IL-6、IL-8的mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯下降(P0.01),M?中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1βmRNA轉(zhuǎn)錄水平也有下調(diào)(P0.01)。DENV-2感染的HUVEC與巨噬細胞共培養(yǎng)與未感染對照組相比,培養(yǎng)上清中IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-α、IL-1β分泌量明顯上升。結(jié)論:DENV-2能夠感染原代HUVECs,且被DENV-2感染的HUVEC能夠活化M?并促使其分泌大量的IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β,同時CYM-5442預處理HUVECs后,能夠減少病毒感染HUVECs引起的主要細胞因子分泌量,一定程度減輕內(nèi)皮細胞的損傷。
【圖文】：

注：1. Marker 2. NS1 序列擴增圖 2-2 DENV-2 NS1 部分序列擴增on of NS1 gene in C6/36 cells infectedV-2 毒力V-2 感染后，每天觀察細胞病變合等典型的病毒感染細胞病變（計算病毒 TCID50值為 10-5.8/0.1表 2-1 DENV-2 毒力測定（TCID5Tab. 2-1 DENV-2 Toxicity Test（TC無病變孔數(shù)累 計病變孔數(shù)無病變孔數(shù)0 42 0

蘇培養(yǎng)傳代后 2 天即可長滿 95%左右，細胞貼壁呈梭型(圖 2-圖 2-3 HUVECs（×200）Fig.2-3 HUVECs（×200）細胞的鑒定PBMC，，貼壁后得到單核細胞，加入 M-CSF 刺激得到巨噬細胞（檢測巨噬細胞（M ）純度為 89.16±2.07%（圖 2-4）。
【學位授予單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 付威;姜英;王婷玉;張赫;董佳琦;萬朋;;巨噬細胞極化與腫瘤的研究進展[J];吉林醫(yī)藥學院學報;2019年02期

2 廖成水;毛福超;程相朝;;巨噬細胞極化在微生物感染中的作用研究進展[J];中國預防獸醫(yī)學報;2019年03期

3 徐曉偉;魏建超;劉珂;邵東華;李蓓蓓;曹瑞兵;陳溥言;馬志永;胡敬東;邱亞峰;;不同激活狀態(tài)的巨噬細胞對流行性乙型腦炎病毒感染的影響[J];中國動物傳染病學報;2019年02期

4 邢士剛;;巨噬細胞在慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機制中的作用研究[J];中國實用醫(yī)藥;2019年12期

5 程相朝;毛福超;;巨噬細胞極化形成的影響因素研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2019年06期

6 巢汝;黃靚;屈順林;張弛;;巨噬細胞能量代謝與動脈粥樣硬化[J];生命的化學;2018年03期

7 崔凡;穰真;王有為;楊戈;;AIDS患者巨噬細胞對白念珠菌的吞噬和滅活功能研究[J];中國麻風皮膚病雜志;2017年04期

8 孟董超;王東;宋娟;盧彥珍;;巨噬細胞極化在冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用研究進展[J];長治醫(yī)學院學報;2017年02期

9 李雪巖;楊玉玉;陳君;;中藥抗巨噬細胞泡沫化的研究進展[J];藥學與臨床研究;2017年05期

10 袁鋒;尚茹茹;張錦;溫婷;李愛萍;劉曉紅;;巨噬細胞極化與動脈粥樣硬化[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2015年22期

相關會議論文 前10條

1 姚芳苡;黃自坤;傅穎媛;;人巨噬細胞極化相關長鏈非編碼RNA表達譜篩選及研究[A];第十二屆全國免疫學學術大會摘要匯編[C];2017年

2 李枋;霏李杰;;扶正解毒方對共培養(yǎng)體系下腫瘤相關巨噬細胞表型變化影響的實驗研究[A];第一屆青年中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學術論壇論文集[C];2015年

3 白力;張文蘭;竇晶莉;王永福;;組蛋白修飾與巨噬細胞極化的關系[A];第十屆全國免疫學學術大會匯編[C];2015年

4 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

5 程相朝;毛福超;廖成水;;巨噬細胞極化形成的影響因素研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物微生態(tài)學分會第五屆第十三次全國學術研討會論文集[C];2018年

6 曾嬌;;巨噬細胞極化對炎癥性疾病的影響[A];第十三屆全國免疫學學術大會摘要匯編[C];2018年

7 李小鵬;張倫理;;巨噬細胞極化現(xiàn)象與結(jié)核病的關系[A];中華醫(yī)學會2014全國微生物學與免疫學學術年會論文匯編[C];2014年

8 陳羅泉;萬曉朋;韓泉;王青青;;白細胞介素27在巨噬細胞抗病毒天然免疫應答中的作用研究[A];浙江省免疫學會第十次學術大會論文集[C];2016年

9 馬曉媛;田李星;靳賀;梁華平;;創(chuàng)傷/燒傷后單核—巨噬細胞變化及調(diào)節(jié)措施研究進展[A];2015第十一屆全國中西醫(yī)結(jié)合災害醫(yī)學大會、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學會第二屆災害醫(yī)學學術會議、中華衛(wèi)生應急電子雜志第二屆編委會會議暨2015江蘇國際醫(yī)療器械科技博覽會學術論文集[C];2015年

10 馬翠卿;胡光磊;尹曉琳;胡潔;楊建嶺;王秀榮;魏林;;A族鏈球菌誘導巨噬細胞壞死而非凋亡[A];河北省免疫學會第六次免疫學大會資料匯編[C];2010年

相關重要報紙文章 前10條

1 主持人 王建新;巨噬細胞的多面人生[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2015年

2 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

3 張化;新技術有望延長血小板保存期[N];中國醫(yī)藥報;2003年

4 張化;半乳糖可延長血小板保存期[N];中國醫(yī)藥報;2003年

5 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

6 記者 張家偉;巨噬細胞水平影響血壓高低[N];健康報;2019年

7 ;癌細胞能通過“別吃我”信號逃避巨噬細胞[N];中國科學報;2019年

8 記者 房琳琳;“別吃我”! 癌細胞還有第二種方式對巨噬細胞這樣說[N];科技日報;2017年

9 本報記者 張曄 通訊員 蔡心軼 張翰文;肥胖傷肝？原來是巨噬細胞在作怪[N];科技日報;2016年

10 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 林妍;let-7a-2-3p/PIK3CG模塊對結(jié)核分枝桿菌感染的巨噬細胞凋亡水平的動態(tài)調(diào)控機制研究[D];吉林大學;2019年

2 琴瀚姣;PI3Kγ抑制劑通過調(diào)控腫瘤相關巨噬細胞提高CA4納米藥物對乳腺癌療效的研究[D];吉林大學;2019年

3 沈東輝;NF-κB調(diào)控巨噬細胞亞型在實驗性自身免疫性神經(jīng)炎中的作用及其機制研究[D];吉林大學;2019年

4 張思悅;基于自噬調(diào)控腫瘤相關巨噬細胞表型極化的金納米�？鼓[瘤機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

5 李天亮;LAPF促進抗細菌天然免疫反應及其機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

6 劉國科;泛素連接酶Nedd4l對巨噬細胞Toll樣受體信號轉(zhuǎn)導的影響[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

7 李華;結(jié)核分枝桿菌誘導的人巨噬細胞蛋白質(zhì)組研究及快生菌構建探索[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2017年

8 范婷婷;TIPE2調(diào)控調(diào)節(jié)性T細胞胸腺外遷及M2巨噬細胞極化的分子機制研究[D];中國科學院大學(中國科學院深圳先進技術研究院);2018年

9 成雪;酪蛋白糖肽抑制巨噬細胞炎癥反應的分子機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2015年

10 邵柏棕;巨噬細胞β-arrestin-1在動脈粥樣硬化和多發(fā)性硬化中的作用及機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2018年

相關碩士學位論文 前10條

1 張玉薇;基于元分析的結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細胞免疫應答關鍵基因的挖掘及驗證[D];吉林大學;2019年

2 葛秋月;人纖溶酶原絲氨酸蛋白酶結(jié)構域制備及其對巨噬細胞極化影響的探究[D];吉林大學;2019年

3 習大林;BLP耐受通過上調(diào)MARCO表達增強巨噬細胞吞噬能力的研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

4 王文明;骨關節(jié)炎患者CD163+巨噬細胞的分布、表型及臨床相關性分析[D];安徽醫(yī)科大學;2019年

5 孟慶元;右美托咪定對巨噬細胞糖酵解的影響及潛在機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

6 周旋;富含亮氨酸/賴氨酸抗菌肽調(diào)控腫瘤相關巨噬細胞極化和抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移的作用研究[D];遼寧師范大學;2019年

7 吳磊;AngⅡ通過上調(diào)Cx43活化NF-κB信號通路誘導巨噬細胞M1型極化的作用研究[D];石河子大學;2019年

8 侯九洲;亞精胺對巨噬細胞極化的影響及其調(diào)控肝癌轉(zhuǎn)移研究[D];河南大學;2019年

9 張夢迪;桑黃多酚對巨噬細胞和脂肪細胞間交互作用的影響[D];河南大學;2019年

10 榮建芳;ROS和HIF-1α的相互作用調(diào)控幽門螺桿菌誘導的巨噬細胞極化[D];南昌大學;2019年

本文編號：2623682