【摘要】：目的:通過PDMS微柱法建立細(xì)胞傷口愈合模型,通過對(duì)比等滲透壓,研究低滲透壓對(duì)細(xì)胞缺口愈合的影響,研究低滲透壓對(duì)細(xì)胞遷移速度、細(xì)胞肌動(dòng)蛋白環(huán)及板狀偽足的影響,并對(duì)低滲透壓對(duì)細(xì)胞缺口關(guān)閉的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。方法:實(shí)驗(yàn)細(xì)胞MDCK細(xì)胞(犬腎上皮細(xì)胞),隨機(jī)分為低滲組(n=5)和等滲組(n=6)作延時(shí)拍攝觀察細(xì)胞運(yùn)動(dòng);用深反應(yīng)離子刻蝕法制作好圓形微陣列凹槽的硅片板,深100μm,直徑180μm。往硅片板上灌注1:10PDMS,加熱后切下即可造好PDMS微柱模具。消毒PDMS微柱模具后,往模具下方種下MDCK細(xì)胞,待單層細(xì)胞長(zhǎng)滿后,拔出柱子即在單層細(xì)胞中造出直徑180微米的缺口。活細(xì)胞工作站下(37°C,5%CO2),顯微鏡下連續(xù)延時(shí)定點(diǎn)拍照,5分鐘拍一張,獲得圖片后分析低滲透壓(~150m Osm)和等滲透壓(~300m Osm)條件下細(xì)胞缺口關(guān)閉速度、偽足面積伸出的情況。此外,MDCK細(xì)胞低滲透壓和等滲透壓條件下分別處理15分鐘后,固定細(xì)胞,并做熒光染色,觀察不同滲透壓下細(xì)胞肌動(dòng)蛋白環(huán)的形成情況。結(jié)果:細(xì)胞缺口關(guān)閉過程邊緣曲線周長(zhǎng)變化圖中,可以看出低滲透下細(xì)胞缺口關(guān)閉比等滲壓下要快。計(jì)算速度后發(fā)現(xiàn),低滲組細(xì)胞愈合速度3.93±1.04μm/min(n=5,mean±s.d.),等滲組細(xì)胞愈合速度1.76±0.18μm/min(n=6,mean±s.d.)。細(xì)胞缺口關(guān)閉過程偽足伸出邊緣面積變化圖中,可以看出低滲透壓下板狀偽足要比等滲壓下的要明顯,低滲壓板狀偽足伸出面積1137.46±70.26μm2(n=5,mean±s.d.),等滲壓板狀偽足伸出面積60.44±21.87μm2(n=6,mean±s.d.)。等滲壓下可見肌動(dòng)蛋白環(huán)的形成,而低滲透壓下幾乎觀察不到。熒光光密度分析曲線圖中,等滲壓下在缺口邊緣出現(xiàn)了熒光光密度的波峰,而低滲透壓下沒有出現(xiàn)。結(jié)論:1、低滲壓環(huán)境下,MDCK細(xì)胞傷口愈合速度比等滲透壓下的更加快。低滲透壓下的板狀偽足比等滲透壓下的更明顯,而低滲透壓下沒有形成肌動(dòng)蛋白環(huán)。2、低滲透壓下,加速細(xì)胞缺口的關(guān)閉可能機(jī)制是通過促進(jìn)板狀偽足的形成。3、在細(xì)胞缺口關(guān)閉過程中,板狀偽足對(duì)關(guān)閉速度的影響比肌動(dòng)蛋白環(huán)的影響更大。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R363

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陳泰霖;低滲透壓通過促進(jìn)板狀偽足的形成加速細(xì)胞缺口的關(guān)閉[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

，

本文編號(hào)：2567126