發(fā)布時(shí)間：2019-08-12 15:07

【摘要】：目的探討腸上皮細(xì)胞O型糖鏈的合成阻滯對(duì)該細(xì)胞腸分化標(biāo)記物MUC2表達(dá)及細(xì)菌黏附的影響。方法采用O型糖鏈抑制劑benzyl-α-GalNAc抑制結(jié)腸上皮細(xì)胞HT-29及其分化型細(xì)胞(HT-29-Gal)O型糖鏈的合成,經(jīng)benzyl-α-GalNAc處理的HT-29和HT-29-Gal細(xì)胞分別命名為HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN。采用Real-time PCR和Western blotting方法檢測(cè)上述4種細(xì)胞中MUC2基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平,并將上述細(xì)胞與致病性大腸埃希菌(EPEC)和腸出血性大腸埃希菌(EHEC)O157:H7共培養(yǎng),采用系列稀釋菌落計(jì)數(shù)法觀察細(xì)菌在上述細(xì)胞表面的黏附情況。結(jié)果 Realtime PCR和Western blotting結(jié)果顯示,經(jīng)benzyl-α-GalNAc處理后,HT-29和HT-29-Gal細(xì)胞MUC2的mRNA和蛋白表達(dá)均明顯減少(P0.05)。HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN細(xì)胞與致病性大腸埃希菌EPEC和EHEC O157:H7的黏附明顯少于HT-29和HT-29-Gal細(xì)胞(P0.05)。結(jié)論抑制腸上皮細(xì)胞O型糖鏈的合成可阻礙細(xì)菌黏附及MUC2的表達(dá)。
【圖文】：

附數(shù)量少于HT-29-OBN細(xì)胞，提示分化程度高的細(xì)胞有阻礙細(xì)菌黏附的作用。HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN細(xì)胞的細(xì)菌黏附數(shù)量明顯少于未經(jīng)處理的HT-29和HT-29-Gal細(xì)胞，表明O型糖鏈的合成與細(xì)菌對(duì)腸上皮細(xì)胞的黏附有關(guān)。綜上所述，我們認(rèn)為O-glycans的合成參與了腸黏液屏障的形成，以及腸道病原體對(duì)腸黏膜上皮細(xì)胞的黏附過(guò)程�！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]GouletO,RuemmeleF,LacailleF,et al.Irreversibleintestinalfailure[J].JPediatrGastroenterolNutr,2004,38(3):250-269.[2]YangDZ,ZhouQQ,LiSZ,et al.Intestinalmucosalbarrier圖1致病性大腸埃希菌(EPEC和EHECO157:H7)對(duì)腸上皮細(xì)胞的黏附能力檢測(cè)Fig.1AdhesionofEPECandEHECO157:H7tointestinalepithelialcells(1)P<0.05;(2)P<0.01圖2Real-timePCR檢測(cè)細(xì)胞MUC2mRNA表達(dá)水平Fig.2MUC2mRNAexpressiondetectedbyreal-timePCR(1)P<0.053討論腸黏液屏障是組成腸黏膜屏障的重要成分，腸道黏蛋白VNTR內(nèi)的O-glycans含有豐富糖鏈，在腸道黏液層內(nèi)是直接與腸道微生物、病毒、毒素相互作用的一線屏障，并直接成為后者結(jié)合、參與代謝、抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的靶點(diǎn)[12-13]。因此，研究黏蛋白分子上決定其生物學(xué)功能的O-glycans與病原微生物之間的相互作用，可更好地理解宿主與病原微生物之間的聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，相對(duì)于HT-29和HT-29-Gal細(xì)胞，HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN細(xì)胞中的MUC2mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平均下降，考慮原因?yàn)镸UC2轉(zhuǎn)錄、翻譯過(guò)程中所涉及的酶、轉(zhuǎn)錄因子或圖3Westernblotting檢測(cè)細(xì)胞MUC2蛋白表達(dá)Fig.3MUC2proteinexpressiondetectedbyWesternblotting(1)P<0.05(1)(2)(2)(2)EHECO157:H7EPEC400350300250200150100500Adherentbac

胞，表明O型糖鏈的合成與細(xì)菌對(duì)腸上皮細(xì)胞的黏附有關(guān)。綜上所述，我們認(rèn)為O-glycans的合成參與了腸黏液屏障的形成，以及腸道病原體對(duì)腸黏膜上皮細(xì)胞的黏附過(guò)程�！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]GouletO,RuemmeleF,LacailleF,et al.Irreversibleintestinalfailure[J].JPediatrGastroenterolNutr,2004,38(3):250-269.[2]YangDZ,ZhouQQ,LiSZ,et al.Intestinalmucosalbarrier圖1致病性大腸埃希菌(EPEC和EHECO157:H7)對(duì)腸上皮細(xì)胞的黏附能力檢測(cè)Fig.1AdhesionofEPECandEHECO157:H7tointestinalepithelialcells(1)P<0.05;(2)P<0.01圖2Real-timePCR檢測(cè)細(xì)胞MUC2mRNA表達(dá)水平Fig.2MUC2mRNAexpressiondetectedbyreal-timePCR(1)P<0.053討論腸黏液屏障是組成腸黏膜屏障的重要成分，腸道黏蛋白VNTR內(nèi)的O-glycans含有豐富糖鏈，在腸道黏液層內(nèi)是直接與腸道微生物、病毒、毒素相互作用的一線屏障，并直接成為后者結(jié)合、參與代謝、抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的靶點(diǎn)[12-13]。因此，研究黏蛋白分子上決定其生物學(xué)功能的O-glycans與病原微生物之間的相互作用，，可更好地理解宿主與病原微生物之間的聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，相對(duì)于HT-29和HT-29-Gal細(xì)胞，HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN細(xì)胞中的MUC2mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平均下降，考慮原因?yàn)镸UC2轉(zhuǎn)錄、翻譯過(guò)程中所涉及的酶、轉(zhuǎn)錄因子或圖3Westernblotting檢測(cè)細(xì)胞MUC2蛋白表達(dá)Fig.3MUC2proteinexpressiondetectedbyWesternblotting(1)P<0.05(1)(2)(2)(2)EHECO157:H7EPEC400350300250200150100500Adherentbacteria(cfu/wel)HT-29-GalHT-29HT-29-Gal-OBNHT-29-OBN2.42.22.01.81.61.41.21.00.80.60.40.20MUC
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍消化病研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81170340)~~
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2525788