【摘要】：目的探討親環(huán)素A在單核細(xì)胞參與氧化應(yīng)激炎癥反應(yīng)中的作用。方法人類(lèi)單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞常規(guī)體外培養(yǎng),以親環(huán)素A作為氧化應(yīng)激炎癥反應(yīng)的主要活性氧誘導(dǎo)刺激因子,Transwell法檢測(cè)親環(huán)素A對(duì)單核細(xì)胞遷移趨化的影響;ELISA檢測(cè)單核細(xì)胞培養(yǎng)液中主要炎癥反應(yīng)因子白細(xì)胞介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量變化;明膠酶譜法測(cè)定基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的活性變化;Western blot檢測(cè)核因子κB(NF-κB)炎癥信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激醇(MAPK)炎癥信號(hào)通路的激活。結(jié)果親環(huán)素A可以誘導(dǎo)單核細(xì)胞遷移趨化,促進(jìn)單核細(xì)胞分泌炎癥反應(yīng)因子IL-6;親環(huán)素A通過(guò)MAPK-NF-κB炎癥信號(hào)通路增強(qiáng)MMP-9活性。結(jié)論親環(huán)素A誘導(dǎo)單核細(xì)胞遷移趨化,促進(jìn)單核細(xì)胞分泌炎癥因子,顯示了其啟動(dòng)單核細(xì)胞炎癥性募集的作用。
【圖文】：

P-actin圖4.CypA對(duì)IkBq：的表達(dá)影響（n=3)a為P<0.05，與0min時(shí)相比。Figure4.EffectsofCypAonI?BaproteinexpressioninTHP-1cells圖1.CypA誘導(dǎo)單核細(xì)胞遷移趨化（四倍鏡）A為空白組，，B為100pg/LCypA組，C為200jxg/LCypA組。Figure1.CypAinducedTHP-1migration2.2CypA對(duì)單核細(xì)胞MMP-9活性的影響THP-1細(xì)胞用200pg/LCypA刺激36h后，提取細(xì)胞培養(yǎng)上清液用明膠酶譜法檢測(cè)MMP-9活性的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單核細(xì)胞經(jīng)CypA刺激36h后，MMP-9活性明顯增強(qiáng)（圖2)。250I 0圖3.CypA對(duì)單核細(xì)胞分泌IL4和TNF-a的影響（n=5)a為P<0.05,與空白組比較。Figure3.EffectsofCypAonsecretionofIL-6andTNF-ainTHP-1cells2.4CypA對(duì)NF-kB信號(hào)通路的影響200(xg/LCypA刺激單核細(xì)胞，在不同時(shí)間段(0,30,60及120min)收集細(xì)胞,提取細(xì)胞總蛋白及細(xì)胞核蛋白，行Westernblot檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CypA在120min內(nèi)可以逐漸激活NF-kB通路，即IKB磷酸化后迅速降解（圖4),同時(shí)伴隨p65的轉(zhuǎn)核（圖5)，在120min達(dá)到高峰。給予CypA活性抑制劑CsA預(yù)處理CypA后，這一作用結(jié)果消失（圖6)，說(shuō)明NF-kB通路的激活確實(shí)由CypA作用產(chǎn)生。3060120minPBS 空白組 CypA組圖2.CypA對(duì)MMP-9活性的影響（n=3)a為P<0.05,與空白組比較。Figure2.EffectofCypAonMMP-9activity2.3CyPA對(duì)單核細(xì)胞IL>6和TNF-a表達(dá)的影響THP-1細(xì)胞用0.5%FBS-RPMI培養(yǎng)24h，再用200^g/LCypA刺激24h后,提取細(xì)胞培養(yǎng)上清液用ELISA檢測(cè)IL>6,TNF-a表達(dá)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),單核細(xì)胞經(jīng)CypA刺激24hfsJL-6的表達(dá)明顯增加，但對(duì)TNF-a的表達(dá)沒(méi)有影響（圖3)。10CN43-1262/R中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志2013年第21卷第9期 793-?

Figure3.EffectsofCypAonsecretionofIL-6andTNF-ainTHP-1cells2.4CypA對(duì)NF-kB信號(hào)通路的影響200(xg/LCypA刺激單核細(xì)胞，在不同時(shí)間段(0,30,60及120min)收集細(xì)胞,提取細(xì)胞總蛋白及細(xì)胞核蛋白，行Westernblot檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CypA在120min內(nèi)可以逐漸激活NF-kB通路，即IKB磷酸化后迅速降解（圖4),同時(shí)伴隨p65的轉(zhuǎn)核（圖5)，在120min達(dá)到高峰。給予CypA活性抑制劑CsA預(yù)處理CypA后，這一作用結(jié)果消失（圖6)，說(shuō)明NF-kB通路的激活確實(shí)由CypA作用產(chǎn)生。3060120minPBS 空白組 CypA組圖2.CypA對(duì)MMP-9活性的影響（n=3)a為P<0.05,與空白組比較。Figure2.EffectofCypAonMMP-9activity2.3CyPA對(duì)單核細(xì)胞IL>6和TNF-a表達(dá)的影響THP-1細(xì)胞用0.5%FBS-RPMI培養(yǎng)24h，再用200^g/LCypA刺激24h后,提取細(xì)胞培養(yǎng)上清液用ELISA檢測(cè)IL>6,TNF-a表達(dá)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),單核細(xì)胞經(jīng)CypA刺激24hfsJL-6的表達(dá)明顯增加，但對(duì)TNF-a的表達(dá)沒(méi)有影響（圖3)。10CN43-1262/R中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志2013年第21卷第9期 793-兩聊■‘■①ctubljopO(％5!su①aido'pA組空白組(_i/6U)9—_iI(_J/6U)BIU_N1
【作者單位】： 江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家青年自然科學(xué)基金(81200222) 鎮(zhèn)江市社會(huì)發(fā)展支撐項(xiàng)目(SH2011053)
【分類(lèi)號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2520305