【摘要】：癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)的常見慢性疾病之一,有20%~30%為難治性癲癇,目前抗癲癇藥物對此很難完全控制。因此,對于癲癇治療新方法的研發(fā)迫在眉睫。近年研究認為,除傳統(tǒng)的化學性突觸外,“非突觸”機制在神經(jīng)元的同步化和癲癇的發(fā)病機制中具有重要地位。連接神經(jīng)元之間通訊的縫隙連接(Gap Junction,GJ)可能是產(chǎn)生驚厥的結(jié)構(gòu)基礎。Cx36是GJ家族中的一員,它可能影響癇性發(fā)作的發(fā)生、維持及傳播,阻斷Cx36通訊可為新型抗癲癇藥的研發(fā)提供新思路。目的:觀察Cx36在海人酸(Kainic Acid,KA)點燃癲癇大鼠模型中的作用及相關(guān)機制,阻斷Cx36是否有抑制癇性放電的作用,以及探討Cx36通過改變細胞骨架穩(wěn)定性而影響癲癇過程的機制。方法:健康、成年、雄性Wistar大鼠228只,采用海人酸杏仁核點燃大鼠癲癇模型,隨機分為正常對照(CONT)組、假手術(shù)(SHAM)組、KA致癇(KA)組,及不同Cx36阻斷劑-甘珀酸(carbenoxolone,CBX)組、奎寧(quinine,QN)組、奎尼丁(quinidine,QND)組。通過皮層腦電活動監(jiān)測、Western Blot、免疫組化、激光共聚焦及HE染色方法,觀察造模后不同時間點(3h、6h、24h、3d、7d)癲癇大鼠皮層腦電活動的變化、Cx36表達變化及病理改變;使用特異性及非特異性Cx36阻斷劑(CBX、QN、QND)預處理癲癇大鼠模型,評價Cx36阻斷劑是否有抑制癇性放電、減少癲癇發(fā)作的作用,觀察Cx36阻斷劑對Cx36表達水平變化的影響,以及細胞骨架的重要組成部分-微管相關(guān)蛋白Ⅱ(microtubule associated protein-2,MAP-2)及突觸前囊泡膜的分子標記-突觸素(synaptophysin,SYP)的變化,進一步探討縫隙連接干預癲癇過程的機制。結(jié)果:(1)KA注射后大鼠腦電均出現(xiàn)多種形式的癇性放電。典型波形有尖波、棘波、尖慢波、棘慢波等。以3h點為最多,24h點仍可記錄到少量癇性波。Western blot法及激光共聚焦法檢測KA致癇后大鼠的海馬Cx36表達在3小時、6小時、24小時、3天及7天時間點的變化特征為先增高后逐漸降低的走勢。KA致癇后3小時大鼠的海馬Cx36的表達量迅速增多,第6小時達高峰,24小時開始逐漸下降,第3天、第7天低于正常水平。KA致癇后6小時、3天、7天組Cx36表達量與SHAM組相比有顯著性差異(p0.05)。3h組海馬CA3區(qū)以神經(jīng)元變性為主,6h組主要病理學改變是神經(jīng)元丟失或死亡。24h、3d、7d組可見神經(jīng)元脫失及不同程度的膠質(zhì)細胞增生。(2)大鼠腹腔注射CBX、QN、QND后對基礎腦電活動沒有明顯改變。于KA致癇后30分鐘觀察腦電活動,可見癇性放電的頻率和幅度顯著減少(p0.05)。90分鐘時間點差異不明顯。Western blot法及激光共聚焦法檢測CBX、QN、QND組Cx36蛋白的表達量顯著降低(p0.05)。(3)采用免疫組化、激光共聚焦法檢測,在CBX、QN、QND組中,SYP表達與SHAM組相比顯著下降(p0.05),MAP-2表達與SHAM組相比亦顯著下降(p0.05)。結(jié)論:(1)海人酸點燃癲癇大鼠模型是研究癲癇發(fā)病機理較理想的動物模型�？p隙連接Cx36作為電突觸可能在癲癇的形成和發(fā)展過程中起到促進的作用。(2)Cx36阻斷劑可能減輕癲癇過程中的癇性放電及癲癇發(fā)作。(3)Cx36阻斷劑可能通過減少縫隙連接通道的開放影響細胞骨架微管裝配和神經(jīng)元細胞間信號傳導,抑制興奮性網(wǎng)絡的形成而減輕癇性放電及癲癇發(fā)作。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R742.1;R-332

【參考文獻】

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1 朱文增;倪金霞;唐強;東貴榮;李紅穎;;“頭穴叢刺法”對局灶性腦梗死大鼠可塑性蛋白MAP-2的影響[J];中國針灸;2010年01期

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本文編號：2473160