發(fā)布時間：2019-02-15 10:06

【摘要】：目的研究同型半胱氨酸對人臍靜脈內(nèi)皮細胞Bcl-2基因啟動子區(qū)甲基化水平及其表達的影響。方法以人臍靜脈內(nèi)皮細胞為實驗對象,用含有不同濃度同型半胱氨酸的RPMI1640培養(yǎng)液對其作用48 h,MTT法測定細胞增殖生長能力并確定實驗藥物濃度;流式細胞術測定細胞凋亡水平;熒光定量PCR測定Bcl-2 mRNA表達;甲基化特異性PCR聯(lián)合巢式降落式PCR測定Bcl-2啟動子區(qū)甲基化水平。結果同型半胱氨酸對人臍靜脈內(nèi)皮細胞的增殖能力有明顯的抑制作用,OD值從0.99±0.05逐漸下降至0.28±0.03(P0.01),呈明顯的劑量效應關系;與對照組相比,實驗組細胞凋亡率由2.30%±0.60%上升至16.40%±0.73%(P0.01),Bcl-2 mRNA表達明顯下降(P0.01),Bcl-2基因啟動子區(qū)甲基化水平降低(P0.05)。結論同型半胱氨酸通過下調(diào)Bcl-2啟動子區(qū)的甲基化水平導致其mRNA表達水平減少,繼而誘發(fā)內(nèi)皮細胞凋亡,這可能在同型半胱氨酸促動脈粥樣硬化過程中起到重要作用。
[Abstract]:Aim to study the effect of homocysteine on methylation level and expression of Bcl-2 gene promoter in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Methods Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were treated with RPMI1640 medium containing different concentrations of homocysteine for 48 h. Apoptosis level was measured by flow cytometry, Bcl-2 mRNA expression was detected by fluorescence quantitative PCR, methylation level of Bcl-2 promoter was detected by methylation specific PCR combined with nested PCR. Results homocysteine significantly inhibited the proliferation of human umbilical vein endothelial cells, and the OD value decreased from 0.99 鹵0. 05 to 0. 28 鹵0. 03 (P0. 01) in a dose-dependent manner. Compared with the control group, the apoptotic rate of the experimental group increased from 2.30% 鹵0.60% to 16.40% 鹵0.73% (P0.01), and the expression of Bcl-2 mRNA decreased significantly (P0.01). The methylation level of promoter region of Bcl-2 gene was decreased (P0.05). Conclusion homocysteine may play an important role in promoting atherosclerosis by down-regulating the methylation level of Bcl-2 promoter resulting in the decrease of mRNA expression and then inducing endothelial cell apoptosis.
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學;寧夏醫(yī)科大學附屬總院心臟中心;
【基金】：寧夏自然科學基金(NZ11266)資助
【分類號】：R341

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