【摘要】：胃腸道長期暴露于大量外來抗原刺激,包括共生菌、致病菌、腸道內(nèi)容物,宿主通過多種途徑維持腸道的免疫穩(wěn)態(tài)。腸道粘膜是輔助性T細(xì)胞17(T helper cell 17,Th17)分化成熟的天然場所,Thl7可分泌白細(xì)胞介素17A(Interleukin17A,IL-17A),白細(xì)胞介素17F (Interleukinl 7F, IL-17F),白細(xì)胞介素21(Interleukin21,IL-21),白細(xì)胞介素22 (Interleukin22, IL-22). IL-17作為Th17的代表細(xì)胞因子,能刺激腸道上皮細(xì)胞分泌抗菌肽。研究還發(fā)現(xiàn)胃腸道和肺中的Th17可以誘導(dǎo)粘膜免疫球蛋白(immunoglobulin A, IgA)。IL-17A和IgA可以協(xié)助維持腸道穩(wěn)態(tài)。盡管Thl7在不同的實驗?zāi)Ｐ椭斜憩F(xiàn)出促進(jìn)炎癥或抑制炎癥的作用,已有研究表明這些細(xì)胞在腸道粘膜穩(wěn)態(tài)中起到重要作用,尤其是在含有大量共生菌群時。但能夠促進(jìn)腸道Th17的分化成熟的細(xì)胞和環(huán)境因素仍需要進(jìn)一步的研究。樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells, DCs)在大腸和小腸固有層廣泛分布,形成緊密的網(wǎng)絡(luò),可以調(diào)節(jié)腸道對共生菌產(chǎn)生的固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。樹突狀細(xì)胞通過表達(dá)歸巢受體α4β7和CCR9指導(dǎo)淋巴細(xì)胞歸巢,使其再循環(huán)至腸道。因此,樹突狀細(xì)胞在控制腸道炎癥及維持免疫穩(wěn)態(tài)中起到重要作用。腸道固有層存在多種亞型的樹突狀細(xì)胞,根據(jù)來源不同及表型,通常將其分CD11c+CD11b+CD8α-樹突狀細(xì)胞即髓系樹突狀細(xì)胞(myloid DC, mDC), CD11c+CD11b-CD8a+樹突狀細(xì)胞即淋巴系樹突狀細(xì)胞(lymphoid DC, IDC), CD11c+CD11b-B220+樹突狀細(xì)胞即漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoid DC,pDC)。小腸中部分樹突狀細(xì)胞表達(dá)CX3CR1, CX3CR1+DC通過上皮間樹突狀細(xì)胞對腸內(nèi)容物檢測取樣從而決定微生物的攝取,進(jìn)而“守衛(wèi)”胃腸道粘膜屏障。近期研究表明一些亞型的腸道固有層樹突狀細(xì)胞表達(dá)CD103,而CD103+和CD103-腸道固有層樹突狀細(xì)胞在介導(dǎo)B淋巴細(xì)胞分泌IgA及腸道營養(yǎng)T淋巴細(xì)胞起到不同的作用,即調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞反應(yīng)。根據(jù)CD103和CDllb的表達(dá)將腸道樹突狀細(xì)胞分為四群,但不同亞群的樹突狀細(xì)胞在腸內(nèi)微生物抗原攝取、遞呈中的作用仍不明了。另外這四種不同的樹突狀細(xì)胞對腸道微生物免疫應(yīng)答的機制到底是協(xié)同合作還是各有分工;如何調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫,怎樣誘導(dǎo)不同的T淋巴細(xì)胞分化發(fā)育仍有待進(jìn)一步研究。一系列研究顯示DCs對不同微生物刺激的應(yīng)答表現(xiàn)出明顯的靈活性或“可塑性”,但更多的證據(jù)表明不同亞型的DC在抗原遞呈、刺激不同類型免疫應(yīng)答的能力上存在本質(zhì)的差異。研究發(fā)現(xiàn)多種不同亞型的樹突狀細(xì)胞表達(dá)不同的Toll樣受體(TLRs),對微生物刺激的反應(yīng)也不同。比如,CD8α-樹突狀細(xì)胞有較強的吞噬能力,CD8a+樹突狀細(xì)胞可以內(nèi)化凋亡細(xì)胞。只有髓系樹突狀細(xì)胞(mDC)可以識別TLR3,4,7,9,并釋放IL-23,IL-12。漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞同樣可以分泌IL-12,但卻不能識別TLR3,4,7,9。表達(dá)TLR5的CD103+CD11b+樹突狀細(xì)胞通過激活TLR5信號通路識別鞭毛激發(fā)固有免疫應(yīng)答,釋放IL-6促進(jìn)腸內(nèi)Th17分化,因此推測腸道固有層樹突狀細(xì)胞可以誘導(dǎo)Th17分化可能與TLR5相關(guān)。信號調(diào)節(jié)蛋白α(Signal regulatory protein alpha, SIRPα/CD172a)是一種保守型跨膜蛋白。CD172α陽性腸道固有層樹突狀細(xì)胞能促進(jìn)Th17成熟分化。TLR5是否介導(dǎo)CD172α陽性腸道固有層樹突狀細(xì)胞識別共生菌、激發(fā)免疫應(yīng)答、誘導(dǎo)Th17分化,從而控制免疫穩(wěn)態(tài)及腸道炎癥需要進(jìn)一步研究�；谝陨侠碚摵脱芯�,本文分兩個部分對以上問題進(jìn)行探討：1、腸系膜淋巴結(jié)與腸固有層樹突狀細(xì)胞TLR5和CD172α表達(dá)量不同誘導(dǎo)不同T細(xì)胞免疫應(yīng)答；2、TLR5介導(dǎo)CD 172 α+腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)微生物抗原特異性Th17成熟分化。研究內(nèi)容：第一部分：1.自CBirl轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)分離脾CD4陽性T淋巴細(xì)胞本研究中依據(jù)Cao等人提取脾CD4陽性T淋巴細(xì)胞經(jīng)典方法,利用CD4特異性的顯微磁珠,對脾內(nèi)淋巴細(xì)胞進(jìn)行陽性分選,流式細(xì)胞術(shù)分析CD4陽性細(xì)胞率約為75%-80%。2.CBir1鞭毛蛋白刺激體內(nèi)脾T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生Thl型免疫反應(yīng)為了研究T細(xì)胞對菌群的反應(yīng),將羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl amino ester,CFSE)標(biāo)記的CBirl特異性CD4陽性T淋巴細(xì)胞通過尾靜脈注射過繼回輸?shù)絋淋巴細(xì)胞受體p鏈和δ鏈敲除(TCRβ×δ-/-)小鼠體內(nèi)。TCRβ×δ-/-小鼠因腸道IgA絕對減少,CBirl特異性CD4陽性T淋巴細(xì)胞可以穿過上皮層。給受體小鼠灌胃重組的CBirl鞭毛蛋白,三天后處死,分離脾淋巴細(xì)胞,流式檢測細(xì)胞內(nèi)因子干擾素γ(interferonγ,IFN-γ)和IL-17A的陽性細(xì)胞數(shù),發(fā)現(xiàn)脾內(nèi)的CBirl轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞只分泌IFN-γ,不分泌IL-17A。3.CBir1鞭毛蛋白刺激體內(nèi)腸固有層內(nèi)T淋巴細(xì)胞既可以產(chǎn)生Th1型免疫反應(yīng),也可以產(chǎn)生Th17型免疫反應(yīng)。將CFSE標(biāo)記的CBirl特應(yīng)性的T淋巴細(xì)胞過繼回輸?shù)絋CRβ×6基因敲除小鼠體內(nèi),同時灌胃CBirl鞭毛蛋白。本研究中依據(jù)Cong等人提取腸道固有層淋巴細(xì)胞的經(jīng)典方法,利用膠原酶消化,梯度離心,得到腸道固有層淋巴細(xì)胞,再用PMA和Ionomycin刺激5小時,與Pacific Blue結(jié)合的CD4陽性的流式抗體標(biāo)記、分選出CD4陽性的T淋巴細(xì)胞,檢測其IFN-γ和IL-17A的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)腸道固有層CBirl轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞既分泌IFN-γ也分泌IL-17A。4.分離提取脾、腸道固有層樹突狀細(xì)胞利用autoMAC磁性分選儀及CDllc抗體標(biāo)記的顯微磁珠對脾、腸道固有層淋巴細(xì)胞進(jìn)行陽性分選,流式細(xì)胞術(shù)檢測CD11c陽性率約為75%。5.CBirl鞭毛蛋白刺激脾樹突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)CBirl特異性T細(xì)胞分化為Thl已有研究報道樹突狀細(xì)胞可以指導(dǎo)T細(xì)胞發(fā)育為不同亞型,所以進(jìn)一步研究是否因為脾內(nèi)樹突狀細(xì)胞和腸道固有層樹突狀細(xì)胞的不同導(dǎo)致Thl和Thl7分化結(jié)果不同。將CBirl特異性T細(xì)胞與脾樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng),給予有TLR5活性的全長CBirl鞭毛蛋白或無TLR5活性的CBirl多肽,用流式細(xì)胞術(shù)檢測FN-γ和IL-17A的表達(dá)。給予CBirl多肽和CBirl鞭毛蛋白處理T細(xì)胞都分泌大量的IFN-γ。6.CBir1鞭毛蛋白刺激腸道固有層樹突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)CBirl特異性T細(xì)胞分化為Th1和Th17將CBir1特異性T細(xì)胞與脾樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng),給予有TLR5活性的全長CBirl鞭毛蛋白或無TLR5活性的CBir1多肽,用流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)給予CBir1多肽的處理組,與腸道固有層樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng),CBir1特異性T細(xì)胞只產(chǎn)生IFN-γ而不產(chǎn)生IL-17A；給予全長CBir1鞭毛蛋白的處理組,與腸道固有層樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)的CBir1特異性T細(xì)胞即表達(dá)IFN-γ也表達(dá)IL-17A。7.腸系膜淋巴結(jié)(Mesenteric lymph nodes,MLN)樹突狀細(xì)胞和腸固有層樹突狀細(xì)胞具有攝取CBirl鞭毛蛋白的能力為檢測MLN樹突狀細(xì)胞和腸道固有層樹突狀細(xì)胞是否可以攝取粘膜表面的CBir1鞭毛蛋白,給予正常野生型小鼠或TCRβ×δ-/-小鼠Alexa 647標(biāo)記CBir1鞭毛蛋白灌胃處理。(Alex 647標(biāo)記CBirl鞭毛蛋白與不標(biāo)記的CBirl鞭毛蛋白刺激CBir1特異性T細(xì)胞增殖的能力相同,而且細(xì)胞因子的表達(dá)也沒有差異。)2小時后,提取MLN樹突狀細(xì)胞和腸道固有層樹突狀細(xì)胞,流式分析CBirl鞭毛蛋白的攝取量.TCRβ×δ-/-小鼠體內(nèi)MLN樹突狀細(xì)胞和腸道固有層樹突狀細(xì)胞都是Alexa 647陽性的,而正常野生型的為陰性。8.腸系膜淋巴結(jié)(Mesenteric lymph nodes,MLN)樹突狀細(xì)胞和腸固有層樹突狀細(xì)胞具有攝取CBir1鞭毛蛋白并刺激T淋巴細(xì)胞免疫能力分別從CBir1轉(zhuǎn)基因小鼠和卵清蛋白(ovalbumin,OVA)特異性TCR轉(zhuǎn)基因小鼠(OT-II小鼠)體內(nèi)分離提取CBir1特異性T細(xì)胞和OVA特異性T細(xì)胞,與TCRβ×δ-/-小鼠體內(nèi)提取的攜帶CBirl鞭毛蛋白的腸道固有層樹突狀細(xì)胞共同培養(yǎng),檢測T細(xì)胞增殖。腸道固有層樹突狀細(xì)胞可以刺激CBir1特異性T淋巴細(xì)胞增殖,不能刺激OVA特異性T細(xì)胞增殖。CBir1鞭毛蛋白灌胃處理的野生型小鼠的腸道固有層樹突狀細(xì)胞不能刺激CBir1特異性T增殖；PBS灌胃的TCRβ×δ-/-小鼠的腸道固有層樹突狀細(xì)胞可以刺激CBir1特異性T細(xì)胞增殖,但增殖水平較低。第二部分：1.脾、腸道固有層樹突狀細(xì)胞TLR5和CD172a的表達(dá)不同亞型的樹突狀細(xì)胞存在于不同組織中,已有研究確定腸道固有層內(nèi)存在髓系樹突狀細(xì)胞(表型為CD11c+CD11b+CD8α-),淋巴系樹突狀細(xì)胞(表型為CD11+c+CD11b-CD8a+),漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(表型為CD11c+CD11b-B220+)。樹突狀細(xì)胞可以表達(dá)多種Toll樣受體,所以我們利用流式檢測TLR5和CD172 a在脾和腸道固有層各種亞型(CD103+, CD103-, CD11b+,CD11b-)樹突狀細(xì)胞的表達(dá)。過去有研究認(rèn)為,與脾樹突狀細(xì)胞相比,多數(shù)CD11c陽性腸道固有層DC表達(dá)TLR5。本文研究結(jié)果表明CD11c+CD11b+和CD11c+CD11b-樹突狀細(xì)胞都表達(dá)TLR5,但是在雙陽性的CD11c+CD11b+腸道固有層樹突狀細(xì)胞中TLR5表達(dá)量比單陽性C D11c+CDllb-腸道固有層樹突狀細(xì)胞高。這些結(jié)果與之前用Alexa標(biāo)記的CBir1鞭毛蛋白作為TLR5的受體確定了TLR5不是CBir1鞭毛菌的特異性受體的結(jié)果相吻合。2.脾樹突狀細(xì)胞受LPS刺激激活免疫反應(yīng)；腸道固有層樹突狀細(xì)胞受CBir1鞭毛蛋白刺激激活免疫反應(yīng)。為檢測脾樹突狀細(xì)胞和固有層樹突狀細(xì)胞不同的TLR5的表達(dá)量是否影響他們對CBir1鞭毛菌刺激的免疫應(yīng)答,分別用全長的CBir1鞭毛蛋白或帶有鞭毛的可以產(chǎn)生CBir1鞭毛蛋白的A4菌處理C57BL/6小鼠的脾樹突狀細(xì)胞或腸道固有層樹突狀細(xì)胞。曾經(jīng)研究表明腸固有層樹突狀細(xì)胞TLR4的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于脾樹突狀細(xì)胞,所以用脂多糖(lipopolysacchirde, LPS)刺激腸道固有層樹突狀細(xì)胞和脾樹突狀細(xì)胞作為對照。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測量細(xì)胞培養(yǎng)24小時后上清液中的細(xì)胞因子表達(dá)。脂多糖刺激脾樹突狀細(xì)胞釋放大量IL-12p70和IL-6,少量IL-23；而在CBir1鞭毛蛋白和帶鞭毛的A4菌刺激后釋放更少的IL-12p70和IL-6,相比之下,腸道固有層樹突狀細(xì)胞對LPS刺激幾乎沒有免疫反應(yīng),但在CBir1鞭毛蛋白和帶鞭毛的A4菌刺激下會釋放大量IL-12p70, IL-23, IL-6。3.TGF-β抗體抑制腸固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th17極化為探究在CBir1鞭毛蛋白遞呈過程中不同的脾樹突狀細(xì)胞和腸內(nèi)固有層樹突狀細(xì)胞釋放的不同的細(xì)胞因子是否誘導(dǎo)不同的T淋巴細(xì)胞免疫,我們將CBir1轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞和野生型的正常C57BL/6小鼠脾樹突狀細(xì)胞或腸道固有層樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)；因TGF-β是Th17極化的必要條件,為檢測腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th17是否有TGF-β介入,我們在T細(xì)胞培養(yǎng)是加入TGF-β抗體,用CBir1鞭毛蛋白刺激3天后測量上清液中細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果顯示與腸道固有層樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)的CBir1特異性T細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-17A；與脾樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)的CBir1特異性T細(xì)胞質(zhì)分泌IFN-γ,不分泌IL-17A。加入TGF-β的抗體可以抑制CBir1特異性T細(xì)胞分泌IL-17A,與腸道固有層樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)的T細(xì)胞分泌IFN-γ增多；與脾樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)的T細(xì)胞IFN-γ的分泌沒有增多。4.CD172α陽性腸道固有層樹突狀細(xì)胞促進(jìn)微生物抗原特異性Th17免疫應(yīng)答從野生型正常C57BL/6小鼠腸固有層分離提取CD172α陽性和CD172α陰性的腸道固有層樹突狀細(xì)胞,與CBirl特異性T細(xì)胞共培養(yǎng),加入可以激活T淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞TLR5信號通路的全長CBirl鞭毛蛋白,或加入可以激活CBir1 T細(xì)胞TLR5卻不能激活樹突狀細(xì)胞TLR5的CBirl多肽(因為其缺少TLR5的結(jié)合位點)。加入CBir1鞭毛蛋白或CBir1多肽,CD172α+和CD172α的腸道固有層樹突狀細(xì)胞都可以激活T細(xì)胞釋放IFN-γ；全長CBirl鞭毛蛋白只能刺激CD172α陽性腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)CBir1特異性T細(xì)胞產(chǎn)生IL-17A,而CBirl多肽則不能刺激CD172α陽性的腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)CBir1特異性T細(xì)胞產(chǎn)生IL-17A。CD172α陰性的腸固有層樹突狀細(xì)胞即使加入可以激活TLR5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的全長CBir1鞭毛蛋白也不能誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化發(fā)育。5.TLR5介導(dǎo)CD172α陽性的腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化發(fā)育為進(jìn)一步確定TLR5在介導(dǎo)CD172α+的腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化發(fā)育中的作用,我們從TLR5基因敲除(TLR5-/-)小鼠體內(nèi)分離提取腸道固有層細(xì)胞與正常野生型小鼠的腸道固有層樹突狀細(xì)胞對比,比較他們在微生物抗原刺激下誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化發(fā)育的能力。同時為檢測TLR5基因敲除小鼠的腸固有層樹突狀細(xì)胞自身誘導(dǎo)Th17分化的能力是否存在缺陷,我們加入TGF-β檢測TLR5基因敲除的腸道固有層樹突狀細(xì)胞是否可以誘導(dǎo)Th17極化。因為全長的CBir1鞭毛蛋白可以激活腸固有層樹突狀細(xì)胞表面的TLR5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,所以可以刺激野生型腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)CBirl特異性T細(xì)胞可以產(chǎn)生IL-17A;TLR5基因敲除小鼠腸道固有層樹突狀細(xì)胞不能誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-17A；但加入TGF-β后TLR5基因敲除小鼠腸道固有層樹突狀細(xì)胞可以誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生IL-17A。野生型和TLR5-/-的腸固有層樹突狀細(xì)胞都可以誘導(dǎo)CBir1特異性T細(xì)胞分泌IFN-γ。研究結(jié)論：第一部分：1.梭狀芽胞桿菌CBir1特異性TCR轉(zhuǎn)基因小鼠脾和腸固有層內(nèi)CBir1特異性T細(xì)胞在CBir1鞭毛蛋白刺激下釋放不同細(xì)胞因子1)在微生物刺激下,胃腸道環(huán)境使效應(yīng)T細(xì)胞分化為Th1和Th17,但在脾內(nèi),效應(yīng)T細(xì)胞只能分化為Th1。2)全長CBir1鞭毛刺激后,脾樹突狀細(xì)胞和腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th1和Th17的功能存在差異。2.腸系膜淋巴結(jié)樹突狀細(xì)胞和腸固有層樹突狀細(xì)胞攝取CBir1刺激T淋巴細(xì)胞免疫1)MLN樹突狀細(xì)胞和腸道固有層樹突狀細(xì)胞可以攝取粘膜表面的CBir1鞭毛蛋白。2)腸腔內(nèi)源性CBir1鞭毛菌跨過粘膜屏障被腸道固有層樹突狀細(xì)胞攝取,誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答。第二部分：1.脾、腸道固有層樹突狀細(xì)胞TLR5和CD172α的表達(dá)腸道固有層樹突狀細(xì)胞中CD103+的細(xì)胞比脾樹突狀細(xì)胞中的多。CD103陽性和CD103陰性樹突狀細(xì)胞的信號調(diào)節(jié)蛋白α的表達(dá)量相同。在胃腸道CD103+和CD103-樹突狀細(xì)胞中,大部分的CD172 α陽性的腸固有層樹突狀細(xì)胞也表達(dá)TLR5。2.CBir1鞭毛菌刺激固有層樹突狀細(xì)胞和脾樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生不同的細(xì)胞因子,同時反映出不同的抗原遞呈能力1)脾樹突狀細(xì)胞對細(xì)菌脂多糖刺激能產(chǎn)生較強的免疫反應(yīng),而對CBir1鞭毛蛋白或A4鞭毛菌刺激產(chǎn)生的反應(yīng)較弱,提示在脾內(nèi)抗原刺激樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)主要通過TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；腸道固有層樹突狀細(xì)胞對LPS刺激基本無反應(yīng),而對CBir1鞭毛蛋白或A4鞭毛菌刺激產(chǎn)生的免疫反應(yīng)較強,提示在腸道內(nèi)抗原刺激樹突狀誘導(dǎo)T細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)主要是通過TLR5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。2)CBir1鞭毛蛋白刺激脾樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生Thl型免疫應(yīng)答；刺激腸固有層樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生Th17型不同的免疫應(yīng)答。3.腸固有層Toll樣受體、信號調(diào)節(jié)蛋白α雙陽性樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th17分化1)微生物抗原刺激CD172a陽性腸道固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化發(fā)育是由于全長的CBirl鞭毛蛋白激活TLR5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；但僅僅激活TLR5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路不足以啟動Th17細(xì)胞發(fā)育增殖。2)TLR5基因敲除的腸固有層樹突狀細(xì)胞在體外誘導(dǎo)T細(xì)胞分化的能力沒有缺陷,之所以不能誘導(dǎo)T細(xì)胞極化是因為缺少Th17極化的必要因素TGF-p。綜上所述,Toll樣受體5通過信號調(diào)節(jié)蛋白a陽性的腸固有層樹突狀細(xì)胞促進(jìn)Th17細(xì)胞分化發(fā)育。研究意義與不足：本研究利用微生物抗原刺激流式細(xì)胞術(shù)分離的CD172a+腸固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)Th17分化,確定了CD172α+腸固有層樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)微生物抗原特異性的Th17極化的能力。大部分CD172a+腸固有層樹突狀細(xì)胞同樣會表達(dá)Toll樣受體5,而TLR5缺陷的腸固有層樹突狀細(xì)胞不能誘導(dǎo)Thl7分化發(fā)育。另外,TLR5基因敲除不會影響CD172a陽性腸固有層樹突狀細(xì)胞分化發(fā)育。因此本研究首次確定了腸道固有層中誘導(dǎo)Th17分化的樹突狀細(xì)胞群的亞型為CD11c+CD172α+TLR5+,進(jìn)一步的機制研究發(fā)現(xiàn),CD172a陽性的腸固有層樹突狀細(xì)胞通過TLR5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)Th17細(xì)胞分化,從而指導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的免疫治療,為今后我們更深入的探討人類消化道疾病的發(fā)病機制和防治策略提供了堅實的理論基礎(chǔ)。該課題不足之處是脾樹突狀細(xì)胞在CBir1鞭毛蛋白刺激只能誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞分化為Thl型細(xì)胞的原因、腸道固有層樹突狀細(xì)胞表面其他Toll樣受體的表達(dá)及臨床意義仍需要進(jìn)一步探討。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392

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1 孔令平,劉妍,黃志勤;樹突狀細(xì)胞的特性與分化發(fā)育[J];贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年02期

2 趙謹(jǐn) ,王心;樹突狀細(xì)胞(dendritic cells)[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2005年06期

3 張臨友,郭松,楊寶峰;激素與樹突狀細(xì)胞[J];國外醫(yī)學(xué)(移植與血液凈化分冊);2005年05期

4 吳萍萍;杜曉英;劉書遜;陳榮軍;壽張飛;陳江華;;不同來源人樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)誘導(dǎo)及鑒定[J];浙江醫(yī)學(xué);2007年09期

5 ;封面圖片——樹突狀細(xì)胞[J];中國廠礦醫(yī)學(xué);2009年04期

6 張錦X,陳海濱,謝慶東,王駿;人血樹突狀細(xì)胞形成細(xì)胞簇功能的體外觀察[J];解剖學(xué)雜志;1997年02期

7 曹華,張銳,裴雪濤;樹突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2000年06期

8 王黎明,劉艷榮,李金蘭,常艷,付家瑜,高暉,陳珊珊;人慢性粒細(xì)胞白血病樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2000年05期

9 夏青,張學(xué)軍;真皮樹突狀細(xì)胞與皮膚病[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊;2000年02期

10 劉青,金巖,吳織芬;樹突狀細(xì)胞與口腔疾病[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2000年06期

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1 蔣應(yīng)明;萬濤;陳國友;夏大靜;周向陽;修方明;張意;曹雪濤;;樹突狀細(xì)胞來源的鈣粘著相關(guān)蛋白新基因的克隆、表達(dá)及功能研究[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 王勝軍;王麗莉;李堅;許化溪;;肺癌患者胸水中樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)和初步鑒定[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

3 徐克成;牛立志;郭子倩;張德春;左建生;;樹突狀細(xì)胞及其在癌腫治療中應(yīng)用[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會第十五次全國消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2003年

4 何廣勝;邵宗鴻;和虹;劉鴻;施白;潔均;曹燕然;Q，

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