【摘要】：目的:探討Hsp90和RLM1中CAⅠ序列在白念珠菌表型轉換過程的調控作用。方法:(1)在不同 Dox 濃度(0、40、100、150μg/mL)的 lee's glucose和lee's GlcNAc培養(yǎng)基中,分別于25℃和37℃條件培養(yǎng)觀察GH1013菌株、基因敲除菌株 GH1013-HSP90/hsp90 和條件性敲除菌株 GH1013-tetO-HSP90/hsp90的菌絲生長情況。(2)利用格德爾霉素抑制Hsp90表達,觀測標準菌株SC5314在發(fā)酵糖原及非發(fā)酵糖原中的生長情況并描繪生長曲線。(3)在GH1013菌株和條件敲除性菌株GH1013-tetO-HSP90/hsp90中構建CDC19、TDH3及PGK1基因與Myc蛋白標簽的重組質粒,Western blot檢測其菌株中目的蛋白的表達情況。(4)將RLMⅠ基因(CA Ⅰ 11、21或30)分別過表達于GH1011(MTLa/α)、GH1322(MTLa/α)菌株,觀察過表達菌株白菌-灰菌表型轉換頻率。結果:(1)1ee's glucose培養(yǎng)基,25℃和37℃培養(yǎng)條件下,Hsp90低表達時菌絲生長能力強。隨Hsp90的表達量提高,菌株的菌絲生長能力減弱。lee'sGlcNAc培養(yǎng)基:①25℃和37℃培養(yǎng)條件下,GH1013菌株和HSP90單敲菌株隨Hsp90表達量升高,菌絲生長能力逐漸減弱。②25℃時HSP90條件性敲除菌株隨Hsp90表達量升高,菌絲生長能力減弱;而37℃時不同的Hsp90表達量,HSP90條件性敲除菌株形成菌絲的能力無明顯差異。另外25℃時,HSP90條件性敲除株在GlcNAc培養(yǎng)基上的生長速度低于glucose培養(yǎng)基。(2)白念珠菌在甘露醇中生長情況最好。Hsp90損傷不影響白念珠菌對葡萄糖、果糖和甘露醇的利用。當GlcNAc作為糖原時,Hsp90持續(xù)低表達會促進白念珠菌的細胞凋亡。(3)成功構建白念珠茵MYC-CDC19、MYC-TDH3和MYC-PGK1重組質粒;Western blot證實Myc-CDC19融合蛋白在GH1013-tetO-HSP90/hsp90菌株中能夠正常表達。(4)具有不同長度CAⅠ序列(CAⅠ11、21或30)的RLM1基因過表達的GH1011菌株的表型未發(fā)生明顯的改變。隨著CA Ⅰ重復數(shù)的增加,RLM1基因過表達的GH1322菌株的白菌向灰菌轉換頻率上升。結論:白念珠菌的表型轉換受到多個基因的調控。(1)白念珠菌的Hsp90表達量越低,促進酵母向菌絲轉換'作用越強。(2)Hsp90表達量下降影響白念珠菌對GlcNAc的利用。(3)Hsp90表達量降低,GlcNAc促進白念珠菌細胞凋亡。(4)Hsp90與白念珠菌對發(fā)酵糖和非發(fā)酵糖原的利用無明顯關系。(5)R1的CA Ⅰ基因型對白念珠菌白菌向灰菌形態(tài)轉換的調控能力具有菌株特異性。
[Abstract]:Aim: to investigate the regulatory effect of CA I sequence in Hsp90 and RLM1 on phenotypic transformation of Candida albicans. Methods: (1) the strains of GH1013 were cultured at 25 鈩，

本文編號：2265103