發(fā)布時間：2018-09-08 06:48

【摘要】：目的篩選獲得日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)核糖體蛋白(SjRibosomal_L18a)編碼基因,預測其B細胞表位�？寺　⒈磉_重組蛋白SjRibosomal_L18a,并比較分析其與合成的B細胞表位的潛在診斷價值。方法利用B細胞表位預測軟件篩選日本血吸蟲蛋白質序列,獲取函數(shù)打分值較高且抗原表位片段多的免疫原性蛋白,合成B細胞表位片段。生物信息學方法分析免疫原性蛋白基因及其編碼蛋白的相對分子質量(M r)、等電點、親水性、信號肽、跨膜區(qū)和功能結構域等理化性質。制備日本血吸蟲各蟲期階段總RNA,逆轉錄PCR(RT-PCR)擴增目的基因,分析各蟲期轉錄本豐度。將擴增產物克隆至原核表達載體pET-28a中,重組質粒轉化至大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3)菌株,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表達,組氨酸標記親和層析法純化重組蛋白。ELISA法比較分析重組蛋白和合成的B細胞表位的潛在診斷價值。結果預測軟件篩選出免疫原性核糖體蛋白SjRibosomal_L18a以及2個B細胞表位(P1和P2)。SjRibosomal_L18a基因開放閱讀框(ORF)由531個堿基組成,編碼176個氨基酸,不含跨膜區(qū)和信號肽,為M r20 741,等電點為11.12。RT-PCR結果顯示,各蟲期均檢測到SjRibosomal_L18a的轉錄本,且轉錄水平均較高。成功構建重組表達質粒SjRibosomal_L18a/pET-28a,誘導表達獲得包涵體形式的重組蛋白,約為M r26 069。ELISA檢測結果顯示,重組蛋白、P1和P2檢測15份慢性血吸蟲病患者血清和15份健康人血清的敏感性和特異性分別為53.3%(8/15)和100%(15/15)、60%(9/15)和100%(15/15)、73.3%(11/15)和100%(15/15)。結論獲得重組蛋白SjRibosomal_L18a及其免疫原性較高的表位片段P1、P2,P1和P2用于血清診斷的敏感性均高于重組蛋白。
[Abstract]:Objective to obtain (Schistosoma japonicum) ribosomal protein (SjRibosomal_L18a) encoding gene from Schistosoma japonicum and predict its B cell epitope. Clone and express recombinant protein SjRibosomal_L18a, and compare its potential diagnostic value with synthetic B cell epitopes. Methods the B cell epitope prediction software was used to screen the protein sequence of Schistosoma japonicum. The immunogenicity proteins with high function score and many antigenic epitope fragments were obtained and the B cell epitope fragments were synthesized. The relative molecular weight (M r), isoelectric point, hydrophilicity, signal peptide, transmembrane region and functional domain of the immunogenicity protein gene and its encoded protein were analyzed by bioinformatics. Total RNA, reverse transcriptional PCR (RT-PCR) amplification of Schistosoma japonicum at different stages was prepared and the abundance of transcripts was analyzed. The amplified product was cloned into prokaryotic expression vector pET-28a and transformed into Escherichia coli (E.coli) BL21 (DE3) strain. Isopropyl- 尾 -Dthiogalactoside (IPTG) was induced expression. The potential diagnostic value of recombinant protein and synthesized B cell epitopes was compared and analyzed by histidine labeling affinity chromatography and Elisa. Results the immunogenicity ribosomal protein SjRibosomal_L18a and two B cell epitopes (P1 and P2) were screened by software. The open reading frame (ORF) of Sj RibosomalL18a gene was composed of 531 bases, encoding 176 amino acids, without transmembrane region and signal peptide. The results of isoelectric point (11.12.RT-PCR) showed that the transcripts of SjRibosomal_L18a were detected in all stages, and the transcription level was higher. The recombinant expression plasmid SjRibosomal_L18a/pET-28a, was successfully constructed to induce the expression of the recombinant protein in the form of inclusion body. The result of 069.ELISA detection showed that the recombinant protein was expressed in the form of inclusion body. The sensitivity and specificity of recombinant protein P1 and P2 were 53.3% (8 / 15) and 100% (15 / 15) 60% (9 / 15) and 100% (15 / 15) in 15 sera of patients with chronic schistosomiasis and 15 cases of healthy persons, respectively, and the sensitivity and specificity were 73.3% (1115 / 15) and 100% (15 / 15), respectively. Conclusion the sensitivity of obtaining recombinant protein SjRibosomal_L18a and its epitope fragments P1, P2, P1 and P2 for serum diagnosis is higher than that of recombinant protein.
【作者單位】： 華東理工大學生物反應器工程國家重點實驗室;中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學重點實驗室 世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲病和絲蟲病合作中心;
【基金】：國家傳染病科技重大專項(No.2009ZX1004-302) 國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)項目(No.2007AA02Z153)~~
【分類號】：R392.1

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