【摘要】：目的檢測肝細胞靶向性半乳糖基化聚乙烯亞胺衍生物Gal-Bu對大鼠肝細胞(BRL-3A)的轉染效率。方法對PEI-Bu化學修飾以半乳糖基團制備Gal-Bu,瓊脂糖凝膠電泳檢測其復合質粒DNA的能力;MTT法檢測Gal-Bu對BRL-3A的細胞毒性;以熒光素酶質粒作為報告基因,測定Gal-Bu在BRL-3A細胞的轉染效率;半乳糖競爭抑制實驗觀察Gal-Bu對肝細胞的靶向性。結果瓊脂糖凝膠電泳表明在質量比15時,Gal-Bu具有復合DNA的能力。在5～100μg/mL濃度范圍內,Gal-Bu和PEI 25 000的細胞毒性隨濃度升高而增大;在同一濃度下,Gal-Bu的細胞毒性小于PEI 25 000(P0.01)。Gal-Bu/DNA在質量比為50時達到最高轉染活性,其數值為PEI 25 000的5.6倍(P0.01),且接近Lipofectamine 2000。半乳糖競爭抑制實驗表明,100 mmol/L的半乳糖可顯著降低Gal-Bu的轉染效率(P0.01),但是并不影響PEI-Bu的轉染效率(P0.05)。結論 Gal-Bu是一種低細胞毒性、高轉染活性的非病毒肝細胞靶向基因載體,在肝臟疾病的基因治療領域中具有潛在的應用前景。
[Abstract]:Aim to investigate the transfection efficiency of hepatocyte targeted galactosylated polyimide derivative (Gal-Bu) on rat hepatocytes (BRL-3A). Methods PEI-Bu was chemically modified with galactose group to prepare Gal-Bu.The ability of agarose gel electrophoresis to detect the cytotoxicity of Gal-Bu to BRL-3A was detected by agarose gel electrophoresis, and the transfection efficiency of Gal-Bu in BRL-3A cells was determined by using luciferase plasmid as reporter gene. The aim of Gal-Bu on hepatocytes was observed by galactose competitive inhibition experiment. Results agarose gel electrophoresis showed that Gal-Bu had the ability to compound DNA at 15:00. The cytotoxicity of Gal-Bu and PEI 25 000 increased with the concentration of 5 渭 g/mL, and the cytotoxicity of Gal-Bu at the same concentration was lower than that of PEI 25 000 (P0.01). Gal-Bu-DNA reached the highest transfection activity when the mass ratio was 50, its value was 5.6 times of that of PEI 25 000 (P0.01) and close to that of Lipofectamine 2000. Galactose competitive inhibition test showed that galactose could significantly reduce the transfection efficiency of Gal-Bu (P0.01), but did not affect the transfection efficiency of PEI-Bu (P0.05). Conclusion Gal-Bu is a non-viral hepatocyte targeting gene vector with low cytotoxicity and high transfection activity. It has potential application in gene therapy of liver diseases.
【作者單位】： 上海交通大學醫(yī)學院附屬新華醫(yī)院老年科;上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院老年科;上海交通大學藥學院;
【基金】：國家自然科學基金(81001416,30973152,81270205) 上海市科委基金(10JC1408902)~~
【分類號】：R341;Q789

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本文編號：2181336