發(fā)布時(shí)間：2018-07-02 22:34

  本文選題：CpG寡聚脫氧核苷序列 + 佐劑��； 參考：《華北理工大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒引起的疾病,狂犬病的死亡率幾乎100%,目前主要的保護(hù)方式是接種疫苗。純化Vero細(xì)胞狂犬病疫苗(Purified Vero Cell Rabies Vaccine,PVRV)是目前的主流應(yīng)用疫苗和人二倍體細(xì)胞狂犬病疫苗(Human diploid cell rabies vaccine,HDCV)是目前公認(rèn)的安全性高的疫苗。但HDCV沒(méi)有取得大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)突破導(dǎo)致其價(jià)格昂貴。更長(zhǎng)免疫持久性的PVRV是以后的研究方向加上很多發(fā)展中國(guó)家對(duì)HDCV的費(fèi)用負(fù)擔(dān)沉重,另外狂犬病被動(dòng)免疫制劑的供應(yīng)不足,及暴露后疫苗接種方案大多需要注射四或五針;獸用狂犬病疫苗接種犬只后免疫效果不佳,27%的免疫犬只中和抗體滴度不足對(duì)機(jī)體起到免疫防御效果。鑒于此,尋找一種能夠增強(qiáng)狂犬病疫苗免疫效果的佐劑能使PVRV具有更長(zhǎng)免疫持久性佐劑和縮短HDCV免疫方案和減少每針劑的抗原量是今后發(fā)展的主要方向,對(duì)于人用疫苗和獸用疫苗均具有潛在的商業(yè)價(jià)值。方法Cp G寡聚脫氧核苷酸(Cp G Oligodeoxynucleotides,Cp G ODN)是人工合成含非甲基化胞嘧啶和鳥(niǎo)嘌呤二核酸的寡聚脫氧核苷酸序列,有關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)該序列是一種效果很好的免疫佐劑。本研究通過(guò)探究不同劑量的Cp G ODN的注射小鼠引起的體液免疫活性并用快速熒光灶抑制試驗(yàn)(Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)檢測(cè)抗狂犬病病毒中和抗體(Rabies virus neutralizing antibody,RVNA)效價(jià)。通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(Enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Polymerase Chain Reaction,PCR)檢測(cè)小鼠脾臟細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4探討此佐劑聯(lián)合狂犬病疫苗對(duì)小鼠細(xì)胞免疫應(yīng)答類(lèi)型。通過(guò)觀察不同劑量Cp G ODN組小鼠脾臟形態(tài)變化、HE染色后的病理改變來(lái)對(duì)佐劑的安全性進(jìn)行評(píng)估。以上實(shí)驗(yàn)研究確定在小鼠體內(nèi)最佳Cp G ODN劑量后。最佳劑量Cp G ODN聯(lián)合市售狂犬病疫苗抗原量和免疫程序的優(yōu)化實(shí)驗(yàn):分為RV組、RV+Cp G ODN組、1/2RV+Cp G ODN組、1/4RV+Cp G ODN組、1/8RV+Cp G ODN組,Essen程序免疫Balb/C小鼠,于首次免疫后第35天取血,離心分離血清進(jìn)行RFFIT檢測(cè)RVNA效價(jià)。Cp G ODN聯(lián)合市售狂犬病疫苗免疫程序優(yōu)化實(shí)驗(yàn):以?xún)舍�、三針、四針、五針的免疫程�?分為含佐劑兩針組(0、3天)、三針組(0、3、7天)、四針組(0、3、7、14天)、五針組(0、3、7、14、28天)和無(wú)佐劑五針組(0、3、7、14、28天),抗原為狂犬病疫苗,佐劑量為最佳劑量,在免疫Balb/C小鼠后,取首次免疫后第35天的鼠血清,進(jìn)行RFFIT抗狂犬病病毒中和抗體效價(jià)檢測(cè)。Cp G ODN聯(lián)合市售狂犬病疫苗暴露后保護(hù)效果研究,狂犬病毒標(biāo)準(zhǔn)攻擊毒珠CVS-11對(duì)Balb/c小鼠攻毒后,用Cp G ODN聯(lián)合不同狂犬病疫苗量(RV、1/2RV、1/4RV、1/8RV)進(jìn)行ESSEN免疫程序注射,對(duì)Balb/c小鼠的暴露后保護(hù)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn),Cp G ODN與狂犬病疫苗組抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率高于疫苗對(duì)照組,抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)時(shí)間早于疫苗對(duì)照組。首次免疫后第35天低劑量和中劑量抗原劑量組中和抗體滴度分別提高5-6倍和3-4倍。首次免疫后第6天,低劑量Cp G ODN組激活的脾細(xì)胞分泌IFN-γ的淋巴細(xì)胞數(shù)均高于RV組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。首次免疫后第14天,Cp G ODN能增加免疫小鼠脾細(xì)胞中分泌IFN-γ的淋巴細(xì)胞數(shù)量,中、低劑量Cp G ODN組分泌IFN-γ的淋巴細(xì)胞的數(shù)高于RV組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。首次免疫后14天和35天,細(xì)胞因子IFN-γm RNA的相對(duì)表達(dá)量5μg Cp G ODN組的相對(duì)表達(dá)量顯著高于RV組(P0.05)。Cp G ODN佐劑能夠顯著增強(qiáng)狂犬病疫苗的Th1型免疫應(yīng)答,能夠促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞的IFN-γ分泌,而Th2型免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子IL-4分泌沒(méi)有明顯變化。首次免疫后第14天,高劑量佐劑免疫組的小鼠脾臟腫大,HE染色后鏡下觀察其白髓中的動(dòng)脈周?chē)馨颓试龊?易染體巨噬細(xì)胞數(shù)目增多,副皮質(zhì)區(qū)易染體巨噬細(xì)胞數(shù)目增多,而低劑量和中劑量組的小鼠的脾臟無(wú)腫大,白髓及其動(dòng)脈周?chē)馨颓收Ｇ移⑿◇w體積較小。疫苗對(duì)照組(RV)的白髓、紅髓界限清晰,組織結(jié)構(gòu)正常。1/4 RV+Cp G ODN組的RVNA效價(jià)略高于無(wú)佐劑的狂犬病疫苗組,1/2RV+Cp G ODN組小鼠血清的RVNA效價(jià)最高。在佐劑Cp G ODN聯(lián)合狂犬病疫苗4針免疫程序下,小鼠產(chǎn)生RVNA效價(jià)最高。RV+Cp G狂犬病疫苗組存活率為50%,高于無(wú)佐劑疫苗對(duì)照組的存活率(30%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論Cp G ODN在小鼠模型上對(duì)狂犬病疫苗有顯著的免疫增效作用,并且Cp G ODN能增強(qiáng)狂犬病疫苗對(duì)暴露后小鼠的免疫保護(hù)效果,是一種潛在的狂犬病疫苗佐劑。
[Abstract]:In this study , we find a kind of adjuvant which can enhance the immune effect of rabies vaccine . The results were as follows : 1 / 2RV + Cp G ODN group , 1 / 4RV + Cp G ODN group , 1 / 8RV + Cp G ODN group , Essen program immunized Balb / C mice . After the first immunization , the antibody positive rate was increased by 5 - 6 and 3 - 4 times . Conclusion Cp - ODN could enhance the immune protective effect of rabies vaccine against rabies vaccine . Conclusion Cp - ODN could enhance the immune protective effect of rabies vaccine against rabies vaccine , and it is a potential vaccine adjuvant for rabies vaccine .
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 何鵬;胡忠玉;;鋁佐劑效應(yīng)的影響因素及鋁佐劑疫苗改進(jìn)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2016年06期

2 陳艷;沈波;紀(jì)惠玲;;影響狂犬疫苗免疫效果因素的分析及預(yù)防措施[J];醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制;2010年06期

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本文編號(hào)：2091147