本文選題：心肌微血管內(nèi)皮細胞 + 原代細胞培養(yǎng)�。� 參考：《中國病理生理雜志》2013年03期

【摘要】：目的:探討一種高效、穩(wěn)定的從小鼠心肌組織中分離培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細胞的方法并觀察細胞的生物學(xué)特性。方法:以多聚賴氨酸對培養(yǎng)皿作預(yù)包被,采用Ⅱ型膠原酶消化、差速貼壁分離法,結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基,分離培養(yǎng)微血管內(nèi)皮細胞并進行擴增。利用倒置顯微鏡觀察細胞生長情況;臺盼藍法、繪制生長曲線和MTT法分別測定心肌微血管內(nèi)皮細胞傳代成活率、不同代生長及增殖特征;以DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1熒光雙標,結(jié)合CD31、vWF和CD34免疫熒光鑒定細胞表面特異性抗原;體外血管形成實驗檢測心肌微血管內(nèi)皮細胞的功能。結(jié)果:酶消化、差速貼壁法分離培養(yǎng)2 d后,細胞呈散在的、小簇狀聚集性生長,4～5 d迅速生長呈單層排列,細胞為梭形、三角形或多角形,7～8 d后呈鋪路石樣即可傳代;傳代細胞經(jīng)臺盼藍法檢測成活率均為95%以上;第1、3代細胞生長曲線近似"S"形,MTT法顯示第1、3代細胞在第2～4 d吸光度變化較明顯(P0.05);隨傳代次數(shù)的增加,第5代細胞生長曲線近似平緩,吸光度無明顯變化,細胞逐漸衰老;DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1熒光雙標陽性率為(89.2±3.5)%,相關(guān)特異性抗原CD31、vWF和CD34免疫熒光鑒定陽性率為(56.7±3.7)%、(78.5±2.6)%和(67.8±4.2)%;體外血管形成實驗顯示,6～12 h后出現(xiàn)明顯的管腔結(jié)構(gòu)。結(jié)論:以多聚賴氨酸作預(yù)包被,采用Ⅱ型膠原酶消化、差速貼壁法并結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基,可獲得純度較高的小鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞,為心臟疾病的研究提供種子細胞。
[Abstract]:Aim: to investigate a high efficient and stable method for isolation and culture of myocardial microvascular endothelial cells (MECs) from mouse myocardial tissues and to observe the biological characteristics of the cells. Methods: the microvascular endothelial cells were precoated with polylysine, digested by type 鈪，

本文編號：2088480