本文選題：人角質(zhì)形成細(xì)胞 + 慢病毒��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報》2013年09期

【摘要】：目的通過對慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT)株和未轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞進(jìn)行比較蛋白組學(xué)分析,找出其差異表達(dá)蛋白,尋找基因修飾組織工程表皮種子細(xì)胞生長特性改變的原因和可能存在的成瘤性安全隱患。方法選擇慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后生長特性發(fā)生明顯改變的轉(zhuǎn)染株細(xì)胞,采用二維電泳技術(shù)對該轉(zhuǎn)染株和未轉(zhuǎn)染株的總蛋白進(jìn)行分離和比較,找出差異表達(dá)蛋白點,再進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜鑒定。從鑒定得到的差異蛋白中選擇可能與細(xì)胞生長特性改變和腫瘤生成相關(guān)的核纖層蛋白B1(lamin B1)采用Western blot和實時熒光定量PCR技術(shù)(qPCR)對其表達(dá)差異進(jìn)行驗證。結(jié)果與未轉(zhuǎn)染株比較,轉(zhuǎn)染株在二維電泳中存在11個差異表達(dá)蛋白點,質(zhì)譜從其中鑒定出7個蛋白質(zhì)。選取其中與細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)的核纖層蛋白B1通過WB和qPCR證實其在轉(zhuǎn)染株中蛋白和轉(zhuǎn)錄水平均存在明顯的高表達(dá)。結(jié)論慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株HaCaT細(xì)胞株相對未轉(zhuǎn)染株核纖層蛋白B1高表達(dá)。這種高表達(dá)可能與轉(zhuǎn)染株細(xì)胞生長特性改變和潛在的成瘤性隱患相關(guān)。
[Abstract]:Objective to find out the differentially expressed protein of lentivirus vector in stable transfection of human keratinocytes (HaCaT) and untransfected HaCaT cells by comparative proteomic analysis. To find out the cause of the change of seed cell growth characteristics and the potential safety hidden danger of tumorigenesis in genetically modified tissue engineering epidermis. Methods two dimensional electrophoresis technique was used to isolate and compare the total proteins of lentivirus vector transfected cells with obvious changes in growth characteristics, and the differentially expressed protein sites were found out. Then tandem mass spectrometry was performed. B1(lamin B1, which may be related to the change of cell growth and tumorigenesis, was selected from the differential protein identified to verify the difference in expression by Western blot and real-time fluorescence quantitative PCR. Results compared with the untransfected strain, there were 11 differentially expressed protein spots in the transfected strain, and 7 proteins were identified by mass spectrometry. Nuclear laminin B1, which is related to cell proliferation and apoptosis, was confirmed to be highly expressed in the transfected cell line by WB and qPCR. Conclusion lentivirus vector stably transfected HaCaT cell line has higher expression of laminin B1 than that of untransfected cell line. This high expression may be associated with changes in cell growth characteristics and potential tumorigenicity of transfected cell lines.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍燒傷研究所 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81071575) 國家重點實驗室自主研究課題Ⅰ類(SKLZZ200904)~~
【分類號】：R373

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本文編號：1977861