本文選題：結核分枝桿菌 + γδT細胞　； 參考：《免疫學雜志》2013年04期

【摘要】：目的以檢測和計算結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)蛋白抗原激活人γδT細胞增殖的活性單位為指標,比較不同提取分離方法制備的Mtb抗原制劑激活人γδT細胞的活性效價。方法培養(yǎng)的Mtb-H37Ra菌株通過高溫和超聲方法處理,分別獲取Mtb耐熱抗原(Mtb-HAg)和超聲處理抗原(Mtb-SoAg),采用超濾離心管(3 K,10 K,30 K)和快速液相蛋白層析(FPLC)分組和分離,獲取不同相對分子質量組分的抗原。采集健康成年人外周血分離獲取PBMC,加入不同質量濃度梯度的Mtb蛋白抗原或其分離組分,并加IL-2培養(yǎng)12 d后熒光抗體染色,流式細胞儀檢測和分析擴增T細胞中γδT細胞的比例,以擴增γδT細胞最高比例的50%(EC50)所對應的質量濃度計算為1個活性單位。結果用活性單位計算法分析發(fā)現(xiàn),某批次的Mtb-HAg(591μg/ml)刺激γδT細胞擴增的EC50為1.4μg/ml,計算其活性單位為0.71 U/μg;某批次低分子Mtb-SoAg(3 K～10 K)(221μg/ml)的EC50為0.8μg/ml,其活性單位為1.25 U/μg。結論通過比較Mtb蛋白抗原不同批次及其不同組分在不同質量濃度下刺激γδT細胞擴增數量的活性,可以計算獲得相應的活性單位,為檢測Mtb蛋白抗原制劑刺激γδT細胞增殖活性建立了標準化的計算方法。
[Abstract]:Objective to detect and calculate the active units of Mycobacterium tuberculosism Mtb protein antigen activated proliferation of human 緯 未 T cells, and compare the activity titers of human 緯 未 T cells activated by Mtb antigens prepared by different extraction and isolation methods.Methods the cultured Mtb-H37Ra strains were treated with high temperature and ultrasound respectively. The Mtb heat-resistant antigen (Mtb-HAg) and ultrasonic treated antigen (Mtb-SoAgG) were obtained. The cells were grouped and separated by ultrafiltration centrifuge tube (3K) and rapid liquid phase protein chromatography (FPLC).The antigens of different molecular weight components were obtained.PBMCs were isolated from the peripheral blood of healthy adults. Mtb antigen or its components were added with different concentration gradient. After 12 days of IL-2 culture, fluorescent antibodies were stained. The proportion of 緯 未 T cells in T cells was detected and analyzed by flow cytometry.The mass concentration corresponding to the highest proportion of 緯 未 T cells was calculated as an active unit.Results the EC50 of 緯 未 T cells stimulated by a batch of Mtb-HAg(591 渭 g / ml was 1.4 渭 g / ml, and its active unit was 0.71 U / 渭 g / 渭 g, and the EC50 of a batch of low-molecular-weight Mtb-SoAg(3 10 KG / ml (221 渭 g / ml) was 0.8 渭 g / ml, and its active unit was 1.25 U / 渭 g / 渭 g.Conclusion by comparing the activity of different batches and different components of Mtb protein antigen stimulated 緯 未 T cell proliferation at different concentrations, the corresponding active units can be obtained.In order to detect the proliferative activity of 緯 未 T cells stimulated by Mtb protein antigen preparation, a standardized calculation method was established.
【作者單位】： 蚌埠醫(yī)學院免疫學教研室安徽省感染與免疫重點實驗室;
【基金】：衛(wèi)生部重大傳染病專項(2012ZX10003006-004)
【分類號】：R392.12

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本文編號：1757717