本文選題：粉塵螨類變應原基因 + 基因改組　； 參考：《中國病原生物學雜志》2013年09期

【摘要】：目的制備粉塵螨1類變應原基因ProDer f 1的突變體并原核表達。方法 PCR擴增ProDer f 1基因,DNaseⅠ酶切后回收≤100bp的基因片段。回收的基因片段進行3輪無引物PCR,并以此為模板用ProDer f1基因的特異性引物進行PCR,切膠回收與ProDer f1基因大小相當?shù)钠?連接pUCm-T載體后測序。DNAMAN軟件分析突變基因,篩選理想的突變體,連接pET-28a(+)載體后轉(zhuǎn)入E.coli BL21感受態(tài)細胞進行原核表達,切膠回收表達產(chǎn)物并進行Western blot驗證。結(jié)果得到ProDer f1基因的突變體C1并成功表達嵌合蛋白,SDS-PAGE電泳分析該蛋白分子質(zhì)量單位為35ku,與預期值相符;Western blot顯示該嵌合蛋白能與粉塵螨變應原致敏兔血清中特異性抗體結(jié)合。結(jié)論成功制備ProDer f1基因的突變體且能在原核表達系統(tǒng)中表達嵌合蛋白。
[Abstract]:Objective to prepare the mutant and prokaryotic expression of class 1 allergen gene ProDer f 1 from Dermatophagoides farinae.Methods ProDer f 1 gene fragment 鈮，

本文編號：1738708