本文選題：Nrf2　切入點：Mkp1　出處：《浙江大學》2015年博士論文

【摘要】：轉錄因子紅細胞系-2 p45相關因子-2 (NF-E2 p45-related Factor 2, Nrf2)通過上調Ⅱ相解毒酶和抗氧化蛋白,介導抗氧化反應,使細胞免受活性氧(ROS)、親電子化合物、細菌等外來物質的損害；Mkpl (DUSP1)通過絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)也在應激反應和炎癥反應中起關鍵調控作用。但這兩個信號通路是否相關,目前尚無報道。為了明確Nrf2和Mkpl之間的調控作用及機制,以及這種相互作用在整體動物體內的生物學意義,本課題利用WT, Nrf2-/-小鼠和Mkpl-/-三種不同基因型動物,分別在親電子化合物叔丁基羥基茴香醚(Butylated hydroxyanisole, BHA),萊菔硫烷(Sulforaphane, SFN)處理下和脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)誘導炎癥病理狀態(tài)下用Taqman, Western blot,免疫組化和Co-IP等方法,從分子水平,細胞水平,組織學水平和整體動物水平,探討了Mkpl與Nrf2/ARE信號通路關鍵分子的關系。本課題一方面用200 mg/kg BHA或25mg/kg SFN處理WT, Nrf2-/-小鼠和Mkp1-/-小鼠,從mRNA水平,蛋白水平和組織學方面研究發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟和小腸中,BHA或SFN能通過激活Nrf2,增加下游基因Nqo1, Gstml的表達,提高GSH水平。組織學上Nrf2和Nqo1,主要分布于小鼠肝臟的中央靜脈周圍和小腸絨毛。BHA或SFN能誘導WT小鼠肝臟中Nrf2入核增加,使Mkpl升高,進一步促進Nrf2下游Nqo1, Gstml, Akrlb8和Hol的表達,而Mkpl-/-小鼠體內BHA或SFN對Nrf2/ARE信號通路的誘導作用明顯減弱。說明Mkp1對BHA或SFN誘導Nrf2/ARE信號通路有調控作用。另外,Nrf2-/-小鼠體內Mkp1的表達也較WT鼠顯著降低,說明Nrf2對Mkp1也具有調節(jié)作用。另一方面,我們用LPS分別處理Raw264.7細胞株和WT, Nrf2-/-和Mkp1-/--三種不同基因型小鼠,從mRNA水平,蛋白水平和組織學方面檢測,發(fā)現(xiàn)Mkp1能與Nrf2結合,在蛋白水平對Nrf2/ARE信號通路調控,并影響炎癥因子的產生。本課題從細胞水平和整體水平明確了Mkp1和Nrf2相互作用,發(fā)現(xiàn)了Mkp1-Nrf2是氧化應激和炎癥反應中重要的信號通路。
[Abstract]:Transcription factor RBC cell line -2 p45 related factor 2 NF-E2 p45-related Factor 2 (Nrf2) mediated antioxidant reaction by up-regulating phase 鈪，

本文編號：1696462