本文選題：NK細胞　切入點：程序性分化　出處：《中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：自然殺傷細胞(NK細胞)是固有免疫系統(tǒng)中的一種重要細胞,在抗病毒、抗腫瘤過程中發(fā)揮著重要作用。在造血干細胞移植過程中,NK細胞是最早出現(xiàn)的免疫細胞,發(fā)揮著重要的抗白血病細胞效應(yīng),而且不會引發(fā)機體移植物抗宿主病。因此,NK細胞在白血病過繼轉(zhuǎn)輸治療方面具有重要的應(yīng)用前景。體外擴增大量功能性NK細胞并獲得有效的治療效果是目前NK細胞臨床應(yīng)用研究的熱點。就這些問題,我們進行了相關(guān)的實驗,得到以下結(jié)果:1、通過采用臍血CD34+干細胞,應(yīng)用不同的細胞因子組合使其最終分化為NK細胞。經(jīng)過五周的培養(yǎng),NK細胞的比例可達到90%以上,擴增約7000倍。通過對不同階段培養(yǎng)細胞差異表達的基因進行聚類及相關(guān)性分析,我們發(fā)現(xiàn)前三周細胞和后兩周細胞之間的基因表達有明顯不同,根據(jù)這一現(xiàn)象,我們將NK細胞的體外分化過程分別命名為程序一和程序二。2、對已報道的轉(zhuǎn)錄因子進行檢測,發(fā)現(xiàn)程序二的細胞與原代NK細胞具有相似的轉(zhuǎn)錄因子表達譜,表明所培養(yǎng)的細胞可以作為研究NK細胞發(fā)育分化的體外模型。進而對兩個分化階段的細胞進行差異表達的轉(zhuǎn)錄因子分析,我們發(fā)現(xiàn)程序一的細胞主要聚集鋅指結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子,而程序二的細胞主要聚集基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)域家族和螺旋-轉(zhuǎn)向-螺旋結(jié)構(gòu)域家族的轉(zhuǎn)錄因子。對相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子進行分析,表明程序一為NK細胞前體,程序二調(diào)控NK細胞的轉(zhuǎn)化以及功能成熟。3、對不同階段培養(yǎng)細胞的趨化因子受體及細胞因子受體表達譜進行分析,我們發(fā)現(xiàn)程序二,即分化的NK細胞表達相對高水平的NK細胞功能相關(guān)受體,表明此細胞具有發(fā)揮相應(yīng)NK細胞活化及殺傷功能的潛能。4、隨后我們對不同階段細胞殺傷性分子的表達進行分析檢測,同樣發(fā)現(xiàn)分化的NK細胞表達更高水平的炎性細胞因子及殺傷相關(guān)的功能分子,并且該細胞具有較強的細胞殺傷活性。5、對所做的芯片進行深層次的挖掘,我們發(fā)現(xiàn)分化的NK細胞表達大量的SLAM家族的受體,包括CD244、CD48、CRACC和NTBA。具有較強殺傷功能的外周血NK及臍帶血NK細胞高表達以上的SLAM家族受體。并且,培養(yǎng)的細胞表達有SAP和EAT-2,確保SLAM家族受體可以傳遞活化性信號。6、通過RT-PCR和流式細胞術(shù)進行檢測,我們發(fā)現(xiàn)血液系統(tǒng)腫瘤細胞系相較于實體瘤細胞系,表達更高水平的SLAM家族對應(yīng)配體,CD48、CD244、CRACC和NTBA。同樣的,臨床白血病病人的白血病細胞也有相應(yīng)配體的表達,提示NK細胞可通過SLAM家族受配體的相互作用更有效殺傷白血病細胞。7、應(yīng)用過表達或干擾SLAM家族配體的細胞進行細胞結(jié)合和殺傷實驗,我們發(fā)現(xiàn)SLAM家族受配體的相互作用可以促進NK細胞與靶細胞的結(jié)合及促進其對靶細胞的殺傷。對臨床白血病病人SLAM家族配體的表達水平與NK細胞的殺傷能力進行檢測,發(fā)現(xiàn)白血病細胞上SLAM家族配體表達水平越高,NK細胞的殺傷能力越強。結(jié)合上述的實驗結(jié)果,我們建立了一個體外大規(guī)模分化擴增NK細胞的體系,并且發(fā)現(xiàn)在NK細胞的發(fā)育分化過程中,無論在轉(zhuǎn)錄因子、細胞受體及功能方面都有明顯的分區(qū),存在一種程序性的分化模式。對分化的NK細胞進行檢測,發(fā)現(xiàn)其表面表達較高水平的SLAM家族受體,與之相對應(yīng)的白血病細胞上表達相應(yīng)的配體,并且該受配體的存在可明顯增強NK細胞與靶細胞的結(jié)合,及促進NK細胞對靶細胞的殺傷。上述結(jié)果提示NK細胞在白血病過繼轉(zhuǎn)輸中有更好的治療效果,并且白血病細胞表面SLAM家族配體的表達可作為NK細胞治療有效性的潛在預(yù)測指標。
[Abstract]:Natural killer cells (NK cells) is a kind of important cells in the innate immune system plays an important role in antiviral and antitumor process. After hematopoietic stem cell transplantation in NK cells is the earliest immune cells play an important effect of anti leukemia cells, but not cause the body graft host disease. Therefore, it has important application prospect of NK cell transfusion therapy in the treatment of leukemia. A large number of adoptive in vitro functional NK cells and obtain effective treatment is currently a hot research and clinical application of NK cells. These problems, we have done experiments, we obtained the following results: 1, through the use of umbilical cord blood CD34+ stem cells, using different cytokine combinations which eventually differentiate into NK cells. After five weeks of incubation, the proportion of NK cells can reach more than 90%, was about 7000 times. Through the different stages of fine culture Clustering analysis and correlation of cell differentially expressed genes, we found the expression between three weeks before and two weeks after cell genes are significantly different, according to this phenomenon, we will in vitro differentiation of NK cells are named for the program and procedures to detect two.2 transcription factors have been reported, found that cell program two and primary NK cells with similar transcription factor expression profiles show that the cultured cells can be used as an in vitro model of NK cell development and differentiation. Then the two stages of differentiation cell factor analysis of differentially expressed transcripts, we found a main program of cell aggregation of zinc finger transcription factor domain the two main program, cell aggregation based domain family and helix turn helix domain transcription factor family of transcription factors. The corresponding analysis shows that a program for NK cell The precursor, NK cell transformation and function control program of two mature.3, in different stages of cultured cells of chemokine receptor and cytokine receptor expression spectrum analysis, we found that the two program, the differentiation of NK cells and NK cells express high levels of relative function related receptor, shows that the cell has played the corresponding activation of NK cells and the cytotoxicity of potential.4, then we in different stages of the molecular expression of cell killing was detected, also found that the differentiation of NK cells and the expression of inflammatory cytokines and higher levels of cytotoxicity of related molecules, and the cells have strong cytotoxic activity of.5, deep mining to do the chip, we found the expression of a large number of SLAM family receptors, differentiated NK cells including CD244, CD48, CRACC and NTBA. have strong killing function of NK in the peripheral blood and umbilical cord blood NK cells with high expression The receptors of the SLAM family. And, the cultured cells expressed SAP and EAT-2, to ensure that the SLAM family receptors can transfer activation signals of.6, were detected by RT-PCR and flow cytometry, we found that tumor cells in blood system compared to the solid tumor cell lines, expression of SLAM family corresponding ligands, higher levels of CD48 CD244, CRACC and NTBA. in the same patient, clinical leukemia leukemia cells have the expression of the corresponding ligand, suggesting that the interaction of NK cells through the SLAM receptor ligand family more effective anti leukemia cell.7, application of overexpression or interference of ligands of the SLAM family cell binding and cytotoxicity assay, we found that the interaction of SLAM family by the ligand can promote the combination of NK and target cells and promote it to kill target cells. The expression level of SLAM in patients with leukemia family ligand NK cells can Force testing, found in leukemia cells SLAM family ligand expression level is higher, NK cell killing ability. According to the experimental results above, we established an in vitro differentiation of NK cell mass amplification system, and found in the development and differentiation of NK cells, both in transcription factors, cell receptors and function there are obvious partition, there is a procedural differentiation model. On the differentiation of NK cells were detected and found higher levels of SLAM receptor expression on the surface of the family, and the expression of the corresponding ligand corresponding to the leukemia cells, and the presence of ligand can significantly enhance the binding of NK cells and target cells, and promote the cytotoxicity of NK cells against target cells. These results suggest that NK cells have a better therapeutic effect in the transmission of leukemia and adoptive, leukemia cell surface ligands of the SLAM family table as an Potential predictors for the effectiveness of NK cell therapy.

【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙自然;;新鮮空氣使干細胞分化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年03期

2 張玉勤;;細胞分化再活化治療腫瘤[J];國外醫(yī)學(xué)情報;1991年01期

3 David　Tenenbaum,饒新華;細胞之源[J];世界科學(xué);2000年11期

4 閆貴新;干細胞研究的重大進展[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2000年11期

5 趙志力;付小兵;;正常與異常的細胞分化[J];感染.炎癥.修復(fù);2001年03期

6 趙志力;付小兵;;修復(fù)細胞分化的調(diào)控機制與鑒別[J];感染.炎癥.修復(fù);2001年04期

7 趙志力;修復(fù)細胞分化的調(diào)控機制與鑒別[J];中國危重病急救醫(yī)學(xué);2002年02期

8 趙志力;付小兵;;不同發(fā)育階段細胞的分化與調(diào)控機制[J];感染.炎癥.修復(fù);2002年01期

9 戴新貴;姚詠明;艾宇航;;輔助性T細胞17的研究進展[J];生理科學(xué)進展;2008年04期

10 ;細胞分化:一個兩階段的過程[J];中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 徐志彥;;《細胞分化》教學(xué)案例(教學(xué)內(nèi)容安排1課時)[A];河北省教師教育學(xué)會第二屆中小學(xué)教師教學(xué)案例展論文集[C];2013年

2 尹青;張雷;李莉;謝丹丹;龔淼;;體外心肌樣環(huán)境對P19細胞向心肌細胞分化的誘導(dǎo)作用[A];中國解剖學(xué)會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

3 丁建東;;圖案化表面與干細胞分化[A];2013年全國高分子學(xué)術(shù)論文報告會論文摘要集——大會邀請報告[C];2013年

4 陳思;黃欣;陳少華;楊力建;鄭海濤;李揚秋;;BCL11B基因在T細胞分化和增殖中調(diào)節(jié)作用的研究[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

5 江鍵;崔黎麗;宋誠榮;王小平;宋茂海;;負極性駐極體誘導(dǎo)3T3細胞表面電荷和游離鈣濃度的變化[A];第四屆中國功能材料及其應(yīng)用學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

6 梁冀;于會梅;傅繼東;郭昂;楊黃恬;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放受體對干細胞分化的調(diào)控[A];中國病理生理學(xué)會受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會聯(lián)合學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

7 羅家江;;TH17細胞的研究進展[A];全國中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

8 項盈;金潔;沈丹;鄭強;謝純剛;賈冰冰;黃國平;王金福;;復(fù)蘇的人骨髓間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)及向多系細胞分化的誘導(dǎo)[A];第10屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

9 汪洋;朱椰凡;余華軍;符竣惠;徐啟綱;曾其強;吳建波;張啟瑜;;三種全肝臟去細胞化流程對細胞外基質(zhì)的影響及細胞組分殘留量的研究[A];2013年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2013年

10 常平安;陳瑞;李薇;伍一軍;;神經(jīng)病靶標酯酶的增強表達抑制哺乳動物細胞的增殖[A];中國環(huán)境誘變劑學(xué)會抗誘變劑和抗癌劑專業(yè)委員會第三次全國學(xué)術(shù)會議、中國毒理學(xué)會生化與分子毒理專業(yè)委員會第五屆學(xué)術(shù)交流會、貴州省環(huán)境誘變劑學(xué)會成立大會暨首屆學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 徐榮祥;人類生命細胞 再生物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)與研究[N];健康報;2007年

2 張佳星;干細胞分化路徑存在差異性[N];中國礦業(yè)報;2008年

3 史軍;剝開黏合的細胞之書[N];健康報;2012年

4 常麗君;美生物學(xué)家打造出“細胞黑客”[N];科技日報;2010年

5 張佳星;分化之路 殊途同歸[N];科技日報;2008年

6 記者 施嘉奇　通訊員 王姿英;探索中藥對干細胞分化的作用[N];文匯報;2009年

7 記者陳超;日開發(fā)細胞間隔離培養(yǎng)技術(shù)[N];科技日報;2003年

8 陳超;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)引發(fā)細胞分化的分子通道[N];科技日報;2010年

9 記者 白毅;我國科學(xué)家用iPS細胞首獲克隆豬[N];中國醫(yī)藥報;2013年

10 記者 錢錚;日本用人類iPS細胞首次制成血小板[N];新華每日電訊;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐紹燦;IL-27、Th1及Th17細胞在MS中的表達及其作用機制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 常凱凱;子宮內(nèi)膜異位灶微環(huán)境IL-10~+Th17細胞的形成及作用機制[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 高華嵩;細胞重編程技術(shù)和移植治療視神經(jīng)損傷的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 李艷明;Hsa-miR-200a調(diào)控紅細胞分化的功能及分子機制研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

5 張林;C-反應(yīng)蛋白通過對T細胞分化的直接調(diào)控參與后天免疫應(yīng)答[D];蘭州大學(xué);2015年

6 蔣云秋;樹突狀細胞Notch信號在1，25-二羥維生素D3調(diào)節(jié)Th17分化中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 史莉瑾;急性腦出血患者外周血調(diào)節(jié)性T細胞與腦相關(guān)抗原的特征及其相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2015年

8 陳博;可注射細胞微球明膠復(fù)合物聯(lián)合血小板裂解液在牙組織工程中的應(yīng)用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 章麗雅;血紅素加氧酶-1調(diào)抑Th17細胞在炎癥性腸病中的作用及機制研究[D];上海交通大學(xué);2013年

10 曹際森;miR-146a調(diào)控Treg細胞抑制小鼠心臟移植免疫排斥的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 丁佳敏;芪藍制劑對人舌鱗癌Tca8113細胞的抗增殖和促凋亡作用的機制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張卓亞;間充質(zhì)干細胞對B6.MRL-Fas~(lpr)小鼠濾泡輔助T細胞的調(diào)節(jié)作用及機制研究[D];南京大學(xué);2015年

3 周明;As_2O_3聯(lián)合γ分泌酶抑制劑影響肝癌HepG_2細胞耐藥性的研究[D];石河子大學(xué);2015年

4 劉冰慧;凋亡細胞對巨噬細胞IL-12家族細胞因子調(diào)控的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 韓青青;Th22細胞及其效應(yīng)因子IL-22與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及合并間質(zhì)性肺病相關(guān)性的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張騰飛;吉西他濱與AMD3100聯(lián)合應(yīng)用于膽管癌RBE細胞株對CXCR4/CXCL12軸的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王們X ;EAAL細胞聯(lián)合全反式維甲酸對人肺腺癌細胞株A549體內(nèi)外作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李超楠;兩種典型OPFRs對PC12細胞的神經(jīng)毒性及其機制探究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

9 楊明;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子1型受體經(jīng)cAMP/PKA信號通路對U87MG細胞凋亡機制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 李廣康;RNAi沉默Rap2B基因?qū)盒赞D(zhuǎn)化BEAS-2B細胞的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號：1615114