本文選題：誘導多潛能干細胞　切入點：胰島素分泌細胞　出處：《第二軍醫(yī)大學學報》2013年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的觀測胰島素轉(zhuǎn)錄關(guān)鍵調(diào)控因子胰腺十二指腸同源框蛋白1(PDX-1)、神經(jīng)分化因子1(NeuroD1)及肌腱膜纖維肉瘤癌基因同系物A(MafA)對小鼠誘導多潛能干細胞(iPS細胞)分化為胰島素分泌細胞的作用。方法篩選鑒定小鼠胚胎成纖維細胞(MEFs)重編程的iPS細胞。以重組腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP聯(lián)合感染小鼠iPS細胞,體外培養(yǎng)后以RT-PCR檢測胰島B細胞功能基因表達;免疫熒光檢測胰島素蛋白表達及定位;ELISA檢測不同糖濃度(0、5、10、20、30、40mmol/L)下胰島素的分泌量。結(jié)果起源于MEFs的iPS細胞能形成邊緣光整的致密克隆,表達干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在體內(nèi)外分化為三胚層組織,顯示MEFs被成功地重編程為iPS細胞。Ad-PDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP感染的小鼠iPS細胞能分化為胰島類B細胞,RT-PCR結(jié)果顯示其胰島B細胞功能基因的表達與小鼠胰島B細胞株MIN6相似。免疫熒光檢測可見胰島類B細胞內(nèi)有胰島素表達。ELISA檢測結(jié)果顯示胰島類B細胞對不同濃度葡萄糖有較好的反應性。結(jié)論胰島素轉(zhuǎn)錄關(guān)鍵調(diào)控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三者能協(xié)同作用,使小鼠iPS細胞分化為具有顯著胰島素合成和分泌能力的胰島素分泌細胞。
[Abstract]:Objective to observe the effects of pancreatic duodenal homeobox protein 1 (PDX-1), neurodifferentiation factor 1 neuroD1 (NDF 1) and oncogene congener Agna MafA (a gene congener of fibrosarcoma tendonitis) on the differentiation of mouse multipotent stem cell (IPS cells) into insulin. Methods the recombinant adenovirus Ad-mPDX-1-IRES-GFP-Ad-mNeuroD1-IRES-GFP-Ad-mMafA-IRES-GFP was used to co-infect mouse iPS cells. After culture in vitro, the functional gene expression of islet B cells was detected by RT-PCR. The expression of insulin protein was detected by immunofluorescence and the secretion of insulin was detected by Elisa under different glucose concentrations. The results showed that iPS cells derived from MEFs could form compact clones with edge light. The dry gene Nanogan Rex-1 + SSEA-1 is expressed and can differentiate into tridermal tissue in vivo and in vitro. The results showed that MEFs was successfully reprogrammed as iPS cell. Ad-mNeuroD-IRES-GFP Ad-mMafA-IRES-GFP infected mouse iPS cells could differentiate into islet B cells. RT-PCR results showed that the expression of islet B cell functional genes was similar to that of mouse islet B cell line MIN6. Immunofluorescence assay showed that the expression of islet B cell functional gene was similar to that of mouse islet B cell line MIN6. The results of insulin expression and Elisa showed that islet B cells were more responsive to glucose at different concentrations. Conclusion PDX-1 neuroD1 and MafA can play a synergistic role in the expression of insulin in pancreatic islet B cells. Mouse iPS cells were differentiated into insulin secretory cells with significant insulin synthesis and secretion ability.
【作者單位】： 蘇州大學附屬第一醫(yī)院普通外科;南通大學附屬醫(yī)院普通外科;
【基金】：國家自然科學基金(81101615,81070656) 中國博士后基金(2012M521107) 江蘇省自然科學基金(BK2010276)~~
【分類號】：R329.2

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本文編號：1609370