本文關(guān)鍵詞： 重組人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 重組人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 創(chuàng)面愈合 瘢痕　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:觀察重組人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(rhaFGF)聯(lián)合重組人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(rhEGF)對(duì)創(chuàng)面愈合的影響并探討其可能的機(jī)理。 方法:①造模及分組:建立新西蘭大耳白兔兔耳全層皮膚缺損模型,先后進(jìn)行濃度梯度實(shí)驗(yàn)和聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)。在濃度梯度實(shí)驗(yàn)中,建立兔耳全層皮膚缺損創(chuàng)面模型,隨機(jī)分為A組(rhaFGF 60U/cm~2)、B組(rhaFGF 90U/cm~2)、C組(rhEGF 20U/cm~2)、D組(rhEGF 40U/cm~2)和E組(等量生理鹽水)共5組。根據(jù)濃度梯度實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)定聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)試劑的濃度。聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)建立模型同前,隨機(jī)分為F組(rhaFGF 60U/cm~2+rhEGF 20U/cm~2)、G組(rhaFGF 60U/cm~2)、H組(hbFGF 60U/cm~2)和I組(等量生理鹽水)共4組。②實(shí)驗(yàn)方法:造模后即開(kāi)始用藥,每隔兩日按不同分組將試劑外用于創(chuàng)面。③實(shí)驗(yàn)評(píng)估:采用透明膜描記法記錄造模后第3、7、10、14d創(chuàng)面愈合面積,計(jì)算出創(chuàng)面愈合率,記錄創(chuàng)面愈合時(shí)間。分別比較A、B、E組,C、D、E組的創(chuàng)面愈合率和愈合時(shí)間。聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn),在第3、7、14d取創(chuàng)面組織,分別用HE染色、免疫組織化學(xué)檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1),逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)VEGF mRNA的表達(dá)變化規(guī)律,觀察不同時(shí)相點(diǎn)創(chuàng)面愈合情況。 結(jié)果:①創(chuàng)面愈合時(shí)間。A組創(chuàng)面平均愈合時(shí)間為(13.57±0.40)d,在第7、10、14d創(chuàng)面愈合率與E組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。C組創(chuàng)面平均愈合時(shí)間為(14.01±0.25)d,在第7、10、14d創(chuàng)面愈合率與E組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。聯(lián)合用藥實(shí)驗(yàn)中,F組創(chuàng)面平均愈合時(shí)間為(13.33±0.12)d,與I組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各個(gè)時(shí)相點(diǎn),其創(chuàng)面愈合率與I組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。②HE染色。造模后第3、7d,F和H組創(chuàng)面成纖維細(xì)胞(FB)、毛細(xì)血管生成較G、I組豐富。第14d,F組創(chuàng)面基本愈合,FB、毛細(xì)血管較其他對(duì)照組少;H組尚未完全愈合,其創(chuàng)面中FB增殖活躍,毛細(xì)血管數(shù)較多;G組組織學(xué)情況介于F、H組之間;各用藥組的愈合情況優(yōu)于I組。③MMP-1免疫組織化學(xué)。在造模后的第3d,各組已開(kāi)始表達(dá)MMP-1,但無(wú)明顯差異(P0.05)。第7d,各組MMP-1含量均達(dá)峰值。與I組相比較,F組差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),G、H組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第14d,各組MMP-1量下降,F、G組顯著少于I組且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在各組之中,H組表達(dá)最多,但與I組相比不具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。④VEGF免疫組織化學(xué)。造模后第3d,各組VEGF蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯差別(P0.05)。第7d,各組VEGF表達(dá)達(dá)高峰,與I組相比較,F組差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),G、H組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第14d,各組VEGF下降。F組顯著少于I組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。G組少于I組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),H組表達(dá)在各組中最多但與I組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④VEGF mRNA RT-PCR結(jié)果。第3d,各組mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯差異;第7d時(shí),F、G組與I組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),H組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著(P0.05);第14d,各組表達(dá)均有下降,但F、G組與I組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),H組表達(dá)在各組中最多但與I組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論:①F組對(duì)兔耳創(chuàng)面愈合有促進(jìn)作用,可促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)、毛細(xì)血管形成與再上皮化形成。②其促進(jìn)創(chuàng)面愈合機(jī)制可能是在早期通過(guò)上調(diào)VEGF mRNA的表達(dá)、增加創(chuàng)面中VEGF和MMP-1量。在晚期,下調(diào)VEGF mRNA的表達(dá)、降低創(chuàng)面中VEGF和MMP-1的含量,可能是其減少瘢痕形成的機(jī)制。③聯(lián)合應(yīng)用細(xì)胞因子(rhaFGF+rhEGF)優(yōu)于單獨(dú)用藥。
[Abstract]:Objective: To observe the effect of recombinant human acidic fibroblast growth factor (rhaFGF) combined with recombinant human epidermal growth factor (rhEGF) on wound healing and to explore its possible mechanism.
Methods: Modeling and grouping: the establishment of New Zealand white rabbits rabbit full-thickness skin defect model, has carried out the concentration gradient test and combination experiment. In the experiment the concentration gradient in a rabbit ear model of full thickness skin defect were randomly divided into A group (rhaFGF 60U/cm~2), B group (rhaFGF 90U/cm~2). Group C (rhEGF 20U/cm~2), D group (rhEGF 40U/cm~2) and E group (normal saline) were divided into 5 groups according to the experimental results. The concentration gradient set combination experiment of reagent concentration. The combination model with experiment, were randomly divided into group F (rhaFGF 60U /cm~2+rhEGF 20U/cm~2), G group (rhaFGF 60U/cm~2). Group H (hbFGF 60U/cm~2) and I group (saline) group. A total of 4 experimental methods: model after the start of treatment, every two days by different groups of reagents for wounds. Results: the transparent membrane plethysmography recorded 3,7,10,14d after wound healing area, Calculate the wound healing rate, wound healing time was recorded. Compared to A, B, C, D, E group, E group wound healing rate and healing time. The combination experiment, take the wound tissue in 3,7,14d, respectively by HE staining, immunohistochemical detection of vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metal protease -1 (MMP-1), reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) detection of mRNA VEGF expression changes, observed at different time points of wound healing.
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本文編號(hào)：1529621