本文關(guān)鍵詞：嘌呤受體P2X7和P2Y2在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨和成脂分化中的作用　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 嘌呤受體 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化 成脂分化

【摘要】：目的探討嘌呤受體P2X7和P2Y2在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)成骨和成脂分化中的作用。方法1.體外實(shí)驗(yàn)(1)受體表達(dá)檢測(cè)：免疫熒光染色檢測(cè)BMSCs上嘌呤受體P2X7和P2Y2的表達(dá),RT-qPCR及Western-blot檢測(cè)受體表達(dá)與細(xì)胞分化狀態(tài)的關(guān)系；(2)細(xì)胞增殖及活性檢測(cè)：CCK-8試劑盒檢測(cè)激活嘌呤受體P2X7和P2Y2對(duì)BMSCs增殖及細(xì)胞活性的影響；(3)成骨分化檢測(cè)：RT-qPCR及Western-blot檢測(cè)成骨指標(biāo)(RUNX2,ALP及OPN)的表達(dá)；茜素紅染色檢測(cè)鈣結(jié)節(jié)形成；ALP(堿性磷酸酶)染色檢測(cè)ALP生成：(4)成脂分化檢測(cè)：RT-qPCR及Western-blot檢測(cè)成脂指標(biāo)(PPARy,FABP4及Adipsin)的表達(dá)；油紅O染色檢測(cè)脂滴生成；(5)基因沉默技術(shù)：siRNA分別沉默P2X7和P2Y2受體,檢測(cè)嘌呤受體P2X7和P2Y2在BMSCs成骨和成脂分化中的作用；(6)信號(hào)通路檢測(cè)：Western-blot檢測(cè)激活嘌呤受體P2X7和P2Y2后其下游被激活的信號(hào)通路。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(1)動(dòng)物模型：用小鼠卵巢切除骨質(zhì)疏松模型研究在體內(nèi)激活嘌呤受體P2X7后對(duì)松質(zhì)骨、皮質(zhì)骨及髓腔內(nèi)脂肪生成的影響；(2)組織形態(tài)學(xué)分析：microCT檢測(cè)松質(zhì)骨和皮質(zhì)骨骨參數(shù)；HE染色檢測(cè)松質(zhì)骨骨參數(shù)和髓腔內(nèi)脂滴形成。結(jié)果1.SD大鼠BMSCs上表達(dá)嘌呤受體P2X7和P2Y2;在成骨分化過(guò)程中P2Y2受體表達(dá)逐漸減少,而P2X7受體表達(dá)逐漸增加；在成脂分化過(guò)程中P2Y2受體表達(dá)逐漸增多,而P2X7受體表達(dá)逐漸減少。2. BzATP通過(guò)激活P2X7受體促進(jìn)BMSCs成骨指標(biāo)表達(dá)、ALP生成及鈣結(jié)節(jié)形成,抑制成脂指標(biāo)表達(dá)及脂滴的形成。P2X7受體的siRNA和特異性拮抗劑(BBG)完全阻止了BzATP的作用。microCT顯示BzATP可以減少因卵巢切除所致的松質(zhì)骨丟失,但對(duì)皮質(zhì)骨的參數(shù)沒(méi)有影響；HE染色顯示BzATP可以增加卵巢切除小鼠的松質(zhì)骨數(shù)目和體積,使骨髓腔內(nèi)脂滴生成減少。3. BzATP刺激使ERK1/2和JNK磷酸化增加,BBG抑制BzATP誘導(dǎo)的ERK1/2和JNK的磷酸化；阻滯ERK1/2和JNK信號(hào)通路后,BzATP對(duì)BMSCs成骨和成脂基因表達(dá)的影響消失。4.UTP(三磷酸尿苷)通過(guò)激活P2Y2受體抑制BMSCs成骨指標(biāo)表達(dá)、ALP生成及鈣結(jié)節(jié)形成,促進(jìn)BMSCs成脂指標(biāo)表達(dá)及脂滴的形成。5.UTP刺激使ERK1/2磷酸化增加,P2Y2受體siRNA抑制UTP誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化；阻滯ERK1/2信號(hào)通路24h后,UTP對(duì)BMSCs成骨和成脂基因表達(dá)的影響消失。結(jié)論1. BzATP通過(guò)P2X7受體激活ERK1/2和JNK信號(hào)通路,促進(jìn)大鼠BMSCs成骨分化、抑制其成脂分化；BzATP可以減少小鼠卵巢切除導(dǎo)致的松質(zhì)骨丟失。2.UTP通過(guò)激活P2Y2受體促進(jìn)大鼠BMSCs成脂分化、抑制其成骨分化；ERK1/2信號(hào)通路介導(dǎo)這個(gè)過(guò)程的起始階段。
[Abstract]:Objective to investigate the purine receptor P2X7 and P2Y2 in rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) osteogenic and adipogenic differentiation effect in vitro. Methods 1. (1) receptor expression detection: immunofluorescence staining to detect the expression of BMSCs purinergic receptors P2X7 and P2Y2, the relationship between RT-qPCR and Western-blot receptor expression detection and differentiation the state of cells; (2) to detect cell viability and proliferation: CCK-8 kit to detect the activation effect of purine receptor P2X7 and P2Y2 on BMSCs cell proliferation and cell activity; (3) the osteogenic differentiation of RT-qPCR and Western-blot detection: detection of osteogenic index (RUNX2, ALP and OPN) expression; alizarin red staining and calcium nodules; ALP (alkaline phosphatase) staining ALP generation: (4) adipogenic differentiation test: RT-qPCR and Western-blot detection into fat index (PPARy, FABP4 and Adipsin) expression; oil red O staining, lipid droplet formation; (5) gene silencing Technology: Si RNA silencing P2X7 and P2Y2 receptor, P2X7 receptor and P2Y2 in detection of BMSCs osteogenic and adipogenic differentiation; (6) signal pathway detection:.2. pathway in vivo detection of Western-blot activation of the purinergic receptor P2X7 and its downstream P2Y2 is activated (1) animal model: resection of the osteoporosis model of activation purine receptor P2X7 in vivo after cancellous bone in mouse ovary, the influence of the cortical bone and intramedullary adipose tissue morphological analysis; (2): microCT detection of cortical and trabecular bone parameters; HE staining cancellous bone marrow cavity parameters and lipid droplet formation. The results of BMSCs 1.SD rats on expression of purine expression of P2X7 and P2Y2; decreased in expression of P2Y2 receptor in bone differentiation, and the expression of P2X7 receptor increased gradually; gradually increase in expression of P2Y2 receptor in adipogenic differentiation process, and gradually reduce the expression of P2X7 receptor.2. BzATP Through the activation of the P2X7 receptor to promote BMSCs osteogenic index expression, ALP formation and formation of calcium nodules, inhibit the formation of.P2X7 receptor antagonist siRNA and lipid index and expression of lipid droplets (BBG) completely blocked the effect of.MicroCT BzATP shows that BzATP can reduce the loss due to ovariectomy induced cancellous bone, but no influence of parameters on the cortical bone; HE staining showed that BzATP can increase the ovariectomized mice cancellous bone marrow cavity number and volume, the accumulation of lipid droplets decreased.3. BzATP stimulated ERK1/2 and JNK phosphorylation increased, BBG inhibited BzATP induced ERK1/2 and JNK phosphorylation; block ERK1/2 and JNK signaling pathway, BzATP BMSCs osteogenic and adipogenic gene expression of.4.UTP disappeared (three triphosphate) through the activation of the P2Y2 receptor inhibits BMSCs expression of osteoblast index, ALP generation and formation of calcium nodules, promote BMSCs expression and lipid index of lipid droplet shape .5.UTP stimulation increased phosphorylation of ERK1/2, P2Y2 receptor siRNA inhibits ERK1/2 induced UTP phosphorylation; block ERK1/2 signaling pathway after 24h, UTP of BMSCs osteogenic and adipogenic gene expression disappeared. Conclusion 1. BzATP through activation of P2X7 receptors ERK1/2 and JNK signaling pathway promotes rat osteogenic differentiation of BMSCs, inhibit the adipogenic differentiation; BzATP mice can reduce the OVX induced cancellous bone loss.2.UTP by activation of P2Y2 receptor promotes rat BMSCs adipogenic differentiation, inhibit their osteogenic differentiation; the initial stage of ERK1/2 signaling pathway mediated by this process.

【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R329.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃月琴;王松波;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成肌和成脂分化的調(diào)控[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2010年07期

2 張國(guó)華;屈長(zhǎng)青;楊公社;;全反式維甲酸抑制豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2007年06期

3 潘志宏;韓寧;;P糖蛋白抑制對(duì)體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年04期

4 范正偉;張晾;潘杰;;TNF-α缺失小鼠前脂肪細(xì)胞成脂分化特征[J];濟(jì)南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年03期

5 吳偉;季菊玲;王奎棟;李智耀;龔雨琴;季煜華;;去乙�；敢种苿㏕SA對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2增殖和成脂分化的影響[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2011年03期

6 王奎棟;李智耀;吳偉;龔雨琴;季煜華;;SAHA抑制間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2的增殖與成脂分化[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2012年06期

7 王新魯;姬云濤;屈長(zhǎng)青;;Rho激酶抑制劑Y-27632對(duì)C3H10T1/2細(xì)胞增殖與成脂分化的作用[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2013年07期

8 張金超;劉丹丹;孫靜;張大威;申世剛;楊夢(mèng)蘇;;Dy~(3+)對(duì)小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞成骨和成脂分化及成骨細(xì)胞橫向分化為脂肪細(xì)胞的影響[J];科學(xué)通報(bào);2008年22期

9 龔雨琴;季煜華;李智耀;王奎棟;;去乙�；敢种苿㏕SA通過(guò)激活ERK和p38抑制間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2012年01期

10 劉革修;朱錦燦;陳小宇;祝愛(ài)珍;劉成成;賴菁;;促紅細(xì)胞生成素通過(guò)激活ERK和p38 MAPK抑制小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化[J];中國(guó)病理生理雜志;2013年11期

相關(guān)會(huì)議論文 前4條

1 王玉;朱國(guó)英;王建平;李旭芳;翟江龍;;輻射對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及向成骨和成脂分化的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

2 劉麗忠;任茂文;黃凱;;人脂肪來(lái)源基質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)和成脂分化[A];第四屆華東六省一市整形外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2007年浙江省整形、美容學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

3 鄒玲玲;魯紅云;劉紅;李玲玲;舒曉春;孫遼;謝丹紅;;GLP-1對(duì)人脂肪干細(xì)胞增殖、成脂分化及脂代謝的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

4 王平;楊光;李遠(yuǎn)棟;吳純標(biāo);;榮筋片影響SAMP6鼠成骨-成脂分化關(guān)鍵調(diào)控因子的實(shí)驗(yàn)研究[A];第二十屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會(huì)、第二屆中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師分會(huì)骨傷科學(xué)術(shù)年會(huì)、第十九屆浙江省中西醫(yī)結(jié)合骨傷科專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 記者 白毅;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨與成脂分化平衡調(diào)控機(jī)制研究獲進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 高紅偉;NCoR在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化中分子調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2016年

2 宋寶全;人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化調(diào)控機(jī)制的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

3 李文凱;嘌呤受體P2X7和P2Y2在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨和成脂分化中的作用[D];華中科技大學(xué);2016年

4 賈兵兵;環(huán)腺苷酸信號(hào)通路調(diào)控人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的作用研究[D];浙江大學(xué);2012年

5 江書(shū)忠;豬脂肪沉積關(guān)鍵基因的篩選及鋅指蛋白KLF13的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 李大虎;CKIP-1負(fù)控間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

7 李海芳;β-腎上腺素受體在小鼠MSCs成骨、成脂分化中的作用[D];清華大學(xué);2010年

8 肖靜;p204在3T3-L1細(xì)胞成脂分化過(guò)程中的表達(dá)及功能研究[D];清華大學(xué);2010年

9 胡麗;IGF1通過(guò)PPARγ-Axin2-Wnt信號(hào)通路促進(jìn)內(nèi)源性脂肪干/前體細(xì)胞成脂分化[D];華中科技大學(xué);2014年

10 楊曉紅;miR-705對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化功能異常的調(diào)控作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李曉敏;健脾活骨方不同部位對(duì)體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化調(diào)節(jié)作用的研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2015年

2 葛志敏;甲狀旁腺激素對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

3 杜蕾蕾;極低頻電磁場(chǎng)對(duì)MSCs的作用及其機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2013年

4 王利娟;抑制Hedgehog信號(hào)通路對(duì)小鼠胚胎間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響[D];浙江農(nóng)林大學(xué);2015年

5 曹美霞;過(guò)表達(dá)RhoA基因?qū)3H10T1/2細(xì)胞成脂分化作用的研究[D];安徽大學(xué);2016年

6 黃艷;基于生物信息技術(shù)構(gòu)建成脂分化分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)查詢和分析平臺(tái)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

7 葉勖;TLR2/TLR4活化相關(guān)微小RNA在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移、分化中的作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

8 張小強(qiáng);杜仲提取物5-羥甲基-2-糠醛誘導(dǎo)細(xì)胞成脂分化的信號(hào)途徑研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 郜一飛;植物提取物Embelin對(duì)小鼠肥胖的影響及機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

10 葉晶晶;胞外鈣離子對(duì)豬BMSCs增殖和成脂分化的影響及作用機(jī)制[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1404592