本文關鍵詞：脂肪酸轉運酶CD36在HBV病毒復制中的作用及分子機制研究　出處：《重慶醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 白細胞分化抗原36 乙型肝炎病毒 復制 鈣離子 Src酪氨酸激酶

【摘要】：目的乙型肝炎病毒(HBV)是一種與宿主代謝密切相關的病毒,宿主營養(yǎng)及代謝狀態(tài)影響HBV病毒復制、合成及感染能力,而HBV感染也可明顯上調一些宿主代謝相關基因的表達,如脂肪酸合成酶(FAS),當敲低FAS的表達可以抑制HBV復制水平。脂肪酸轉運酶(CD36)是參與脂質代謝過程的重要膜糖蛋白分子,在長鏈脂肪酸的跨膜轉運及代謝性炎癥的發(fā)生中起著重要作用。近年研究發(fā)現,CD36可與丙型肝炎病毒(HCV)E1蛋白相互作用促進HCV的入侵與復制;CD36還影響人類免疫缺陷病毒(HIV)的組裝與分泌。有趣的是,我們在表達HBV的HepG2.2.15細胞中發(fā)現CD36表達水平顯著增加,因此,推測CD36表達水平變化可能與HBV生命活動存在聯系。本研究擬探討脂肪酸轉運酶CD36是否會影響HBV復制及其可能的分子機制。方法在兩種HBV復制的HepG2.2.15、HepAD38細胞中,利用CD36過表達和靶向RNA干擾(RNAi)慢病毒構建CD36過表達和CD36基因沉默細胞模型。用C57BL/6J野生型(WT)小鼠和CD36基因敲除(CD36KO)小鼠為動物模型,經尾靜脈水動力注射PGEM-HBV1.3質粒,建立hbv急性感染模型。通過體內外實驗觀察cd36過表達和cd36基因敲低對hbv復制水平的影響。用轉錄組測序法篩選hepg2.2.15-cd36過表達與對照細胞轉錄組中的差異表達基因,以探尋cd36影響hbv復制的可能分子機制。以流式細胞技術分析cd36表達水平的改變對細胞內鈣離子水平的影響。使用鈣離子螯合劑bapta-am處理cd36過表達細胞,以及用提升胞漿內鈣離子的毒胡蘿卜素處理cd36rnai細胞,提取hbvdna進行熒光定量pcr檢測,分析鈣離子試劑對cd36誘導的hbv復制的影響。用westernblotting方法檢測cd36過表達對src酪氨酸激酶磷酸化水平的影響,以src激酶抑制劑su6656處理cd36過表達細胞觀察hbv復制水平變化。結果southernblot及熒光定量pcr結果均顯示,無論是hepg2.2.15還是hepad38細胞中,cd36過表達組與對照組相比,細胞中hbv的復制水平顯著增加;而cd36基因沉默后,hbv復制水平明顯下降。此外,cd36過表達組hbeag、hbsag的表達水平也高于對照組,cd36rna干擾組hbeag、hbsag的表達水平顯著低于對照組。在急性hbv感染小鼠模型中,cd36ko抑制hbvdna水平以及hbeag、hbsag、hbcag的表達。轉錄組測序結果顯示,cd36過表達影響細胞內一些離子通道蛋白和鈣離子結合蛋白的表達。進一步的研究顯示,cd36過表達可以增加細胞內ca2+水平,而cd36基因沉默后的細胞內ca2+水平呈下降趨勢。鈣離子螯合劑bapta-am降低細胞內鈣離子能抵消cd36過表達所導致的hbv復制增加,同樣毒胡蘿卜素能依靠增加細胞內的鈣離子水平而恢復CD36基因沉默后所導致的HBV減少的趨勢。由于Src酪氨酸激酶與細胞內鈣離子穩(wěn)態(tài)和HBV復制相關,本研究發(fā)現CD36過表達能夠增加Src酪氨酸激酶磷酸化水平,而Src酪氨酸激酶抑制劑SU6656能夠抑制HBV復制。結論宿主脂質代謝的關鍵調節(jié)因子CD36可通過影響細胞內Ca2+水平和Src酪氨酸激酶途徑而調節(jié)HBV的復制。該研究將有助于我們進一步了解宿主營養(yǎng)代謝與HBV間的關系,為未來通過調節(jié)宿主代謝而建立針對HBV的防治策略提供理論依據。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R373.21

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 趙自然;;新鮮空氣使干細胞分化[J];基礎醫(yī)學與臨床;2010年03期

2 張玉勤;;細胞分化再活化治療腫瘤[J];國外醫(yī)學情報;1991年01期

3 David　Tenenbaum,饒新華;細胞之源[J];世界科學;2000年11期

4 閆貴新;干細胞研究的重大進展[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2000年11期

5 趙志力;付小兵;;正常與異常的細胞分化[J];感染.炎癥.修復;2001年03期

6 趙志力;付小兵;;修復細胞分化的調控機制與鑒別[J];感染.炎癥.修復;2001年04期

7 趙志力;修復細胞分化的調控機制與鑒別[J];中國危重病急救醫(yī)學;2002年02期

8 趙志力;付小兵;;不同發(fā)育階段細胞的分化與調控機制[J];感染.炎癥.修復;2002年01期

9 戴新貴;姚詠明;艾宇航;;輔助性T細胞17的研究進展[J];生理科學進展;2008年04期

10 ;細胞分化:一個兩階段的過程[J];中華婦幼臨床醫(yī)學雜志;2009年02期

相關會議論文 前10條

1 徐志彥;;《細胞分化》教學案例(教學內容安排1課時)[A];河北省教師教育學會第二屆中小學教師教學案例展論文集[C];2013年

2 尹青;張雷;李莉;謝丹丹;龔淼;;體外心肌樣環(huán)境對P19細胞向心肌細胞分化的誘導作用[A];中國解剖學會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

3 丁建東;;圖案化表面與干細胞分化[A];2013年全國高分子學術論文報告會論文摘要集——大會邀請報告[C];2013年

4 陳思;黃欣;陳少華;楊力建;鄭海濤;李揚秋;;BCL11B基因在T細胞分化和增殖中調節(jié)作用的研究[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

5 江鍵;崔黎麗;宋誠榮;王小平;宋茂海;;負極性駐極體誘導3T3細胞表面電荷和游離鈣濃度的變化[A];第四屆中國功能材料及其應用學術會議論文集[C];2001年

6 梁冀;于會梅;傅繼東;郭昂;楊黃恬;;內質網鈣離子釋放受體對干細胞分化的調控[A];中國病理生理學會受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會聯合學術會議論文匯編[C];2010年

7 羅家江;;TH17細胞的研究進展[A];全國中西醫(yī)結合血液學學術會議論文匯編[C];2010年

8 項盈;金潔;沈丹;鄭強;謝純剛;賈冰冰;黃國平;王金福;;復蘇的人骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及向多系細胞分化的誘導[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

9 汪洋;朱椰凡;余華軍;符竣惠;徐啟綱;曾其強;吳建波;張啟瑜;;三種全肝臟去細胞化流程對細胞外基質的影響及細胞組分殘留量的研究[A];2013年浙江省外科學學術年會論文匯編[C];2013年

10 常平安;陳瑞;李薇;伍一軍;;神經病靶標酯酶的增強表達抑制哺乳動物細胞的增殖[A];中國環(huán)境誘變劑學會抗誘變劑和抗癌劑專業(yè)委員會第三次全國學術會議、中國毒理學會生化與分子毒理專業(yè)委員會第五屆學術交流會、貴州省環(huán)境誘變劑學會成立大會暨首屆學術交流會論文集[C];2004年

相關重要報紙文章 前10條

1 徐榮祥;人類生命細胞 再生物質的發(fā)現與研究[N];健康報;2007年

2 張佳星;干細胞分化路徑存在差異性[N];中國礦業(yè)報;2008年

3 史軍;剝開黏合的細胞之書[N];健康報;2012年

4 常麗君;美生物學家打造出“細胞黑客”[N];科技日報;2010年

5 張佳星;分化之路 殊途同歸[N];科技日報;2008年

6 記者 施嘉奇　通訊員 王姿英;探索中藥對干細胞分化的作用[N];文匯報;2009年

7 記者陳超;日開發(fā)細胞間隔離培養(yǎng)技術[N];科技日報;2003年

8 陳超;科學家發(fā)現引發(fā)細胞分化的分子通道[N];科技日報;2010年

9 記者 白毅;我國科學家用iPS細胞首獲克隆豬[N];中國醫(yī)藥報;2013年

10 記者 錢錚;日本用人類iPS細胞首次制成血小板[N];新華每日電訊;2009年

相關博士學位論文 前10條

1 唐紹燦;IL-27、Th1及Th17細胞在MS中的表達及其作用機制研究[D];山東大學;2015年

2 常凱凱;子宮內膜異位灶微環(huán)境IL-10~+Th17細胞的形成及作用機制[D];復旦大學;2014年

3 高華嵩;細胞重編程技術和移植治療視神經損傷的實驗研究[D];復旦大學;2014年

4 李艷明;Hsa-miR-200a調控紅細胞分化的功能及分子機制研究[D];中國科學院北京基因組研究所;2015年

5 張林;C-反應蛋白通過對T細胞分化的直接調控參與后天免疫應答[D];蘭州大學;2015年

6 蔣云秋;樹突狀細胞Notch信號在1，，25-二羥維生素D3調節(jié)Th17分化中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

7 史莉瑾;急性腦出血患者外周血調節(jié)性T細胞與腦相關抗原的特征及其相關性研究[D];鄭州大學;2015年

8 陳博;可注射細胞微球明膠復合物聯合血小板裂解液在牙組織工程中的應用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

9 章麗雅;血紅素加氧酶-1調抑Th17細胞在炎癥性腸病中的作用及機制研究[D];上海交通大學;2013年

10 曹際森;miR-146a調控Treg細胞抑制小鼠心臟移植免疫排斥的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 丁佳敏;芪藍制劑對人舌鱗癌Tca8113細胞的抗增殖和促凋亡作用的機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張卓亞;間充質干細胞對B6.MRL-Fas~(lpr)小鼠濾泡輔助T細胞的調節(jié)作用及機制研究[D];南京大學;2015年

3 周明;As_2O_3聯合γ分泌酶抑制劑影響肝癌HepG_2細胞耐藥性的研究[D];石河子大學;2015年

4 劉冰慧;凋亡細胞對巨噬細胞IL-12家族細胞因子調控的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 韓青青;Th22細胞及其效應因子IL-22與類風濕關節(jié)炎及合并間質性肺病相關性的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 張騰飛;吉西他濱與AMD3100聯合應用于膽管癌RBE細胞株對CXCR4/CXCL12軸的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 王們X ;EAAL細胞聯合全反式維甲酸對人肺腺癌細胞株A549體內外作用的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

8 李超楠;兩種典型OPFRs對PC12細胞的神經毒性及其機制探究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

9 楊明;促腎上腺皮質激素釋放因子1型受體經cAMP/PKA信號通路對U87MG細胞凋亡機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 李廣康;RNAi沉默Rap2B基因對惡性轉化BEAS-2B細胞的作用[D];鄭州大學;2015年

本文編號：1349685