本文關(guān)鍵詞：抗人降鈣素原特異性單克隆抗體的制備鑒定及初步應(yīng)用　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2013年06期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的獲得抗人降鈣素原(procalcitonin,PCT)單克隆抗體,并鑒定其基本特性。方法從NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得PCT編碼序列,以原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)PCT重組蛋白,經(jīng)鎳親和層析柱純化,獲得篩選單克隆抗體的篩選原;綜合應(yīng)用多種生物信息學(xué)分析軟件預(yù)測(cè)PCT中潛在的B細(xì)胞表位肽,用合成肽對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行免疫,純化單克隆抗體,通過(guò)間接ELISA、Western blot和免疫組化鑒定獲得的單克隆抗體。將獲得的單克隆抗體作為捕獲抗體,經(jīng)過(guò)配對(duì)建立檢測(cè)重組PCT的ELISA體系,并初步對(duì)臨床血清進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果成功獲得3株P(guān)CT特異性單克隆抗體,分別為2-D7、2-H12和4-H12,亞類分別為IgG1和IgG2a,最高效價(jià)為1∶1 024 000,親和力最高可達(dá)到1.3×109L/mol;選取2-D7經(jīng)Western blot鑒定能夠檢測(cè)重組PCT蛋白,經(jīng)免疫組化證實(shí)能特異性識(shí)別甲狀腺組織中PCT蛋白,經(jīng)過(guò)配對(duì)成功建立了檢測(cè)重組PCT的ELISA體系,運(yùn)用建立體系檢測(cè)臨床血清PCT含量時(shí)發(fā)現(xiàn)正常組與細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性組之間具有顯著差異。結(jié)論成功表達(dá)了人PCT重組蛋白,獲得了3株高特異性和高親和力的PCT單克隆抗體,成功建立了檢測(cè)重組PCT的ELISA體系,并初步用于臨床樣本檢測(cè)。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床生物化學(xué)教研室;
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 降鈣素原(procalcitonin,PCT)是一種無(wú)激素活性的降鈣素前肽物質(zhì)[1],來(lái)自于定位第11號(hào)染色體上的單拷貝基因,該基因由2 800個(gè)堿基對(duì)組成,含6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子,相對(duì)分子質(zhì)量約為13×103。在正常代謝下,甲狀腺C細(xì)胞產(chǎn)生PCT并分泌激素活性的降鈣素。正常人血中PCT濃度極低,但

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