本文關(guān)鍵詞：硫酸化膽汁酸水解酶基因BSSH1克隆、表達(dá)及活性

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【摘要】：目的從銅綠假單胞菌克隆出硫酸化膽汁酸水解酶(BSS)基因,并表達(dá)蛋白產(chǎn)物、研究其活性。方法通過序列比對(duì)確定銅綠假單胞菌中的目的序列BSS H1;通過PCR擴(kuò)增獲得BSS H1基因全序列,將其插入pET30b(+)載體,并將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)。通過優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)條件,實(shí)現(xiàn)重組蛋白BSS H1的高效表達(dá);通過BSS-HSD酶聯(lián)法初步研究其酶活性質(zhì)。結(jié)果工程菌擴(kuò)大培養(yǎng)3 h、以終濃度為1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)5 h時(shí)蛋白表達(dá)量最高;研究發(fā)現(xiàn)BSS H1能催化底物生成3α和3β兩種構(gòu)型的羥基膽汁酸,在pH 8.5時(shí),其活性分別是(632±65)U/L和(52±4)U/L。結(jié)論成功構(gòu)建BSS H1高效表達(dá)菌株。BSS H1能催化生成兩種立體異構(gòu)體的特性在其他BSS中未見報(bào)道,其機(jī)制尚不明確,值得深入研究。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室;四川大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院化學(xué)工程系;
【分類號(hào)】：R341
【正文快照】： 膽汁酸主要由肝臟合成,儲(chǔ)存在膽囊中,進(jìn)食后隨膽汁排到腸道,99%通過肝腸循環(huán)返回肝臟。當(dāng)肝膽機(jī)能障礙時(shí),大量膽汁酸會(huì)逆流入血,機(jī)體作為解毒機(jī)制使大量的膽汁酸轉(zhuǎn)化成硫酸化膽汁酸,經(jīng)腎臟由尿液排出體外[1],因此,尿中的硫酸化膽汁酸可作為肝膽疾病的早期診斷指標(biāo)[2-3]。目前

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1271578