本文關(guān)鍵詞：豬帶絳蟲(chóng)TSO45W-4B基因的克隆、表達(dá)和抗體制備

  更多相關(guān)文章： 豬帶絳蟲(chóng) TSOW-B 表達(dá) 純化 抗體

【摘要】：目的克隆、表達(dá)豬帶絳蟲(chóng)TSO45W-4B基因,以重組蛋白TSO45W-4B免疫兔制備抗體。方法全基因合成豬帶絳蟲(chóng)TSO45W-4B抗原編碼基因,定向克隆至pGEX-1λT表達(dá)載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-TSO45W-4B。轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌ArcticExpress(DE3)后,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析表達(dá)情況。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)親和層析柱純化后,免疫新西蘭大白兔,制備抗血清。GST親和層析柱純化獲得血清中抗體后,ELISA測(cè)定抗體效價(jià),蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)鑒定抗體特異性。結(jié)果酶切和測(cè)序結(jié)果表明,重組質(zhì)粒pGEX-TSO45W-4B構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果顯示,重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量(M r)約為40 000,經(jīng)GST親和層析后可獲得純度為90%以上的重組蛋白。ELISA結(jié)果顯示,抗體的效價(jià)為1∶512 000。Western blotting分析結(jié)果顯示,該抗體能與純化的重組蛋白發(fā)生特異性反應(yīng),在約M r40 000處出現(xiàn)一條帶,與預(yù)期大小一致。結(jié)論豬帶絳蟲(chóng)TSO45W-4B基因能在大腸埃希菌中表達(dá),制備了TSO45W-4B重組蛋白和兔抗血清。
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)學(xué)教研室;遵義醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院中醫(yī)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81160206) 貴州省教育廳資助項(xiàng)目(黔教2010040號(hào))~~
【分類(lèi)號(hào)】：R383.3
【正文快照】： 豬囊尾蚴病(cysticercosis cellulosae)又稱(chēng)囊蟲(chóng)病(cysticercosis),是由豬帶絳蟲(chóng)(Taenia solium)的中絳期幼蟲(chóng)寄生在人體皮下、肌肉、腦和眼等器官引起的一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的人獸共患寄生蟲(chóng)病,已成為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。中國(guó)是囊尾蚴病高發(fā)國(guó)家之一,其中以東北、華北、

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 駱學(xué)農(nóng);鄭亞?wèn)|;胡志敏;丁軍濤;張少華;侯俊玲;竇永喜;郭愛(ài)疆;景志忠;才學(xué)鵬;;豬帶絳蟲(chóng)45W-4BX和TSOL18的高效表達(dá)及免疫效果研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2008年02期

2 駱學(xué)農(nóng);鄭亞?wèn)|;竇永喜;侯俊琳;景志忠;才學(xué)鵬;;豬帶絳蟲(chóng)TSO45W-4BX與豬CD58分子在大腸埃希菌中的聯(lián)合表達(dá)[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2006年04期

3 張榕燕;李莉莎;林金祥;;豬帶絳蟲(chóng)病和豬囊尾蚴病3例報(bào)告[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2007年04期

4 周必英;陳雅棠;李文桂;;豬囊尾蚴病DNA疫苗研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2010年02期

5 駱學(xué)農(nóng);鄭亞?wèn)|;竇永喜;郭愛(ài)疆;侯俊琳;景志忠;才學(xué)鵬;;豬帶絳蟲(chóng)不同階段45W-4BX和18kD基因聯(lián)合表達(dá)及保護(hù)性分析[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年02期

6 王福梅;駱學(xué)農(nóng);景志忠;岳城;才學(xué)鵬;;豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴45W-4B重組蛋白的免疫原性研究[J];中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲(chóng)病;2006年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 楊麥貴;楊陽(yáng);岳波;李媛;鄭善鑾;樊愛(ài)琳;屈玲;羅小楠;郝曉柯;;腸絳蟲(chóng)病誤診誤治分析[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2011年18期

2 張榕燕;林開(kāi)鉛;林金祥;;豬帶絳蟲(chóng)感染1例報(bào)告[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

3 宋震宇;劉金明;何金桃;孫帥;石耀軍;李浩;陸珂;林矯矯;岳城;;東方田鼠血清篩選噬菌體展示抗原對(duì)小鼠日本血吸蟲(chóng)病免疫效果觀(guān)察[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年12期

4 周必英;陳雅棠;李文桂;;豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TSO45W基因工程疫苗研究進(jìn)展[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2009年02期

5 李文桂;陳雅棠;;豬帶絳蟲(chóng)45W蛋白疫苗的研制現(xiàn)狀[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2012年03期

6 周必英;陳雅棠;李文桂;;豬囊尾蚴病DNA疫苗研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志;2010年02期

7 孫曉林;才學(xué)鵬;米曉云;陳懷濤;;豬帶絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵及六鉤蚴膜超微結(jié)構(gòu)的觀(guān)察[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年01期

8 周必英;周泠;劉美辰;劉暉;張曦;;豬帶絳蟲(chóng)TSOL18基因的表達(dá)、純化和兔抗血清的制備[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2013年10期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 鞏偉;豬囊尾蚴pVAX1-AgB重組質(zhì)粒的免疫效果研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 宋震宇;東方田鼠抗血吸蟲(chóng)抗性相關(guān)靶基因（血清篩選）的研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 劉立軍;TSOL18基因的克隆及其表達(dá)產(chǎn)物的抗原性與毒性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

4 高紀(jì)振;抗CD58蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2009年

5 牟靜;多頭帶絳蟲(chóng)四川株六鉤蚴Tm45W基因的克隆與原核表達(dá)[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 方強(qiáng);孫新;夏惠;徐勝貴;胡守鋒;楊小迪;陳興智;王雪梅;;豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴期特異性抗原基因真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1/TSO45-4B的構(gòu)建[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年04期

2 徐勝貴;方強(qiáng);孫新;夏惠;楊小迪;胡守鋒;陳興智;王雪梅;;抗豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴兔血清的制備及重組質(zhì)粒pcDNA3.1/TSO45-4B在小鼠骨骼肌的表達(dá)[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年05期

3 王慶敏,陳蕊雯,郭瀛軍,孫樹(shù)漢;豬囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保護(hù)性研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年06期

4 吳丹,郭瀛軍,林懿,孫樹(shù)漢;豬囊尾蚴抗原DNA疫苗誘導(dǎo)的免疫保護(hù)效應(yīng)[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年06期

5 孫樹(shù)漢,郭瀛軍,陳蕊雯,楊樺;核酸疫苗pcDNA3-γcC1誘導(dǎo)囊尾蚴細(xì)胞凋亡的作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年11期

6 吳丹,郭瀛軍,王慶敏,孫樹(shù)漢;豬白細(xì)胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的應(yīng)用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年11期

7 吳丹,王慶敏,陳蕊雯,朱維佳,陳祖歡,孫樹(shù)漢;豬囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白質(zhì)疫苗聯(lián)合誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年01期

8 武梅,高榮,李江凌,孟明杰,龍章富,唐漫書(shū),殷雪,沈翼,王麗煥,巫雪艷,謝鴻觀(guān),劉世貴;CpG序列及陽(yáng)離子脂質(zhì)體對(duì)豬帶絳蟲(chóng)抗原基因免疫應(yīng)答的影響[J];高技術(shù)通訊;2002年07期

9 龍章富,高榮,孟民杰,武梅,鄭勇,劉昆,劉世貴;脂質(zhì)體包裹豬白細(xì)胞介素6基因?qū)ωi帶絳蟲(chóng)抗原基因免疫小鼠的影響[J];高技術(shù)通訊;2003年03期

10 弭靜;T細(xì)胞CD2活化途徑研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));1998年04期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 袁改玲;豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TSOL18重組基因工程疫苗的研制[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曾霞;王樹(shù)聲;畢勝利;周永東;張濤;劉敏;王昭孝;;伯氏疏螺旋體外膜蛋白A的表達(dá)及純化[J];中華慢病雜志;2003年01期

2 余傳信;殷旭仁;李健;許永良;徐明;高琪;梁幼生;;日本血吸蟲(chóng)超氧化物歧化酶的表達(dá)與免疫活性鑒定[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2007年03期

3 羅塏煒;樊學(xué)軍;呂冰;陳肖瀟;劉志廣;田綠波;萬(wàn)康林;;重組結(jié)核分枝桿菌CFP10蛋白的表達(dá)、純化和復(fù)性及其免疫特性的研究[J];中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

4 趙善民;江鷹;趙勇;毛峰峰;張彩勤;郭曉雅;白冰;師長(zhǎng)宏;;結(jié)核分枝桿菌RpfA蛋白的表達(dá)、純化與鑒定[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2011年02期

5 宋麗君;余傳信;謝曙英;殷旭仁;錢(qián)春艷;王s，

本文編號(hào)：1255504