本文關(guān)鍵詞：E8.5-E12.5大鼠胚胎整體原位雜交技術(shù)

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【摘要】：目的:通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,建立大鼠胚胎整體原位雜交方法。方法:E8.5-E10.5大鼠胚胎4%多聚甲醛固定6 h,不經(jīng)蛋白酶K消化;E11.5-E12.5胚胎4%多聚甲醛固定過夜,蛋白酶K系列稀釋實(shí)驗(yàn)確定消化濃度和時(shí)間。E8.5-E12.5胚胎預(yù)雜交2 h,地高辛標(biāo)記的甘油二酯激酶ζ(DGKζ)寡核苷酸探針雜交24 h,山羊血清封閉2.5～3 h,地高辛抗體4℃過夜,冷TBST和NTMT漂洗1～2 h,NBT/BCIP避光顯色。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法觀察DGKζ在E12.5大鼠胚胎組織的表達(dá)。結(jié)果:DGKζ在不同胚齡大鼠胚胎均有清晰的雜交信號(hào),主要集中在神經(jīng)系統(tǒng);E12.5大鼠胚胎腦泡、背根神經(jīng)節(jié)有較強(qiáng)表達(dá),與免疫組化結(jié)果一致。結(jié)論:本研究建立了簡(jiǎn)便、可行、重復(fù)性高的E8.5-E12.5大鼠胚胎整體原位雜交方法。
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學(xué)組織胚胎學(xué)教研室;山西焦煤西山煤電集團(tuán)公司職工總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【基金】：山西省自然科學(xué)基金(2008011079-2) 山西醫(yī)科大學(xué)科技創(chuàng)新基金(01200719)
【分類號(hào)】：R321
【正文快照】： 胚胎發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的生物過程,多種基因共同參與調(diào)節(jié)。脊椎動(dòng)物的胚胎整體原位雜交技術(shù)始于二十世紀(jì)九十年代,可以直觀顯示基因在胚胎發(fā)育過程中的時(shí)空表達(dá),是一種能精確反映基因表達(dá)三維信息的技術(shù)手段[1]。胚胎整體原位雜交實(shí)驗(yàn)繁雜、過程較長(zhǎng),有多個(gè)重要步驟影響最終實(shí)驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 吳燕,馬子敏,劉淑紅,范文紅,范明;小鼠胚胎整體原位雜交實(shí)用技術(shù)的建立[J];解剖學(xué)報(bào);2004年04期

2 肖翠英,Ditsa Levanon,張思仲,Yoram Groner;一種進(jìn)行基因表達(dá)研究的有效技術(shù)——小鼠全胚胎RNA原位雜交[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2004年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 樊z巖，

本文編號(hào)：1241448