本文關(guān)鍵詞：人類細(xì)小病毒B19基因組NS1、VP1和VP2基因克隆及對(duì)宿主Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的影響研究

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【摘要】：背景人類細(xì)小病毒B19 (Human parvovirus B19)是在1975年被首次發(fā)現(xiàn)的直徑只有23nnm的無(wú)包膜單鏈DNA病毒,主要通過(guò)呼吸道、血液、血液制品以及母嬰垂直傳播,呈全球性分布,春季是發(fā)病高峰期。在宿主感染B19病毒后,宿主首先產(chǎn)生IgM,這種免疫球蛋白可以持續(xù)大約3個(gè)月的時(shí)間,感染兩周后,宿主可以產(chǎn)生IgG,這種免疫球蛋白可以在宿主體內(nèi)持續(xù)終生。B19病毒的基因組主要包含三個(gè)開(kāi)放閱讀框：NS1、VP1和VP2。本實(shí)驗(yàn)室前期研究了B19病毒在我國(guó)獻(xiàn)血人群中的流行率,但是關(guān)于B19病毒對(duì)宿主固有免疫,特別是Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的作用還沒(méi)有相關(guān)研究。目的在Hela細(xì)胞系中高表達(dá)NS1、VP1和VP2,研究高表達(dá)目的基因?qū)τ谒拗魃蓛?nèi)源性干擾素以及對(duì)于宿主Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的影響。方法通過(guò)基因克隆將NS1、VP1和VP2分別克隆到表達(dá)載體pcDNA3.1-3tag上形成pcDNA3.1-3tag-NS1、pcDNA3.1-3tag-VP1和pcDNA3.1-3tag-VP2重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至Hela細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR,RT-PCR)以及免疫印跡(Western Blot, WB)的實(shí)驗(yàn)方法分別檢測(cè)目的基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)。在確認(rèn)目的基因可以在蛋白水平高表達(dá)后,我們通過(guò)RT-PCR檢測(cè)目的基因?qū)τ谒拗骷?xì)胞生成內(nèi)源性干擾素以及ISGs表達(dá)的影響；通過(guò)WB檢測(cè)目的基因?qū)TAT1磷酸化的影響；通過(guò)雙熒光報(bào)告基因檢測(cè)目的基因?qū)SRE活性的影響。結(jié)果成功克隆了NS1、VP1和VP2的重組質(zhì)粒,均能在細(xì)胞mRNA水平高表達(dá),但只有NS1可以在蛋白水平高表達(dá)。轉(zhuǎn)染NS1后可以促進(jìn)細(xì)胞生成內(nèi)源性干擾素,干擾素刺激后,NS1可以在STAT1磷酸化、ISRE活性以及ISGs表達(dá)三個(gè)層次抑制細(xì)胞Ⅰ型干擾素信號(hào)通路。結(jié)論NS1可以激活宿主固有免疫,刺激宿主細(xì)胞生成Ⅰ型干擾素,可以在p-STAT1、 ISRE活性和ISGs表達(dá)三個(gè)層次抑制Ⅰ型干擾素信號(hào)通路。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R373

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1 李臣賓;IFN-ω的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));2005年01期

2 劉星;石賀欣;王琛;;干擾素調(diào)控因子3:細(xì)胞抗病毒反應(yīng)的核心轉(zhuǎn)錄因子[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2010年08期

3 曹雪濤;;E3泛素連接酶Nrdp1優(yōu)先促進(jìn)TLR介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生[J];中國(guó)基礎(chǔ)科學(xué);2010年03期

4 劉穎;趙興卉;張曉鵬;于蕊;吳詩(shī)坡;張哲;戴萌萌;付玲;侯利華;;EV71抑制Ⅰ型干擾素信號(hào)通路中ISGF3的核轉(zhuǎn)位[J];軍事醫(yī)學(xué);2013年10期

5 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 詹森林;張國(guó)良;鐘紅劍;金曉菲;林巧;張明霞;陳心春;周伯平;;不同結(jié)核分枝桿菌菌株對(duì)Ⅰ型干擾素基因的誘導(dǎo)作用及其在結(jié)核病患者外周血中的表達(dá)[A];中國(guó)防癆協(xié)會(huì)80周年紀(jì)念暨2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2013年

2 梁淑娟;魏海明;田志剛;;IFN-α通過(guò)STAT3,STAT1信號(hào)通路上調(diào)NK細(xì)胞的殺傷活性[A];第七屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

3 舒紅兵;;病毒感染誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機(jī)制(英文)[A];第三屆細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的信號(hào)基礎(chǔ)研討會(huì)論文摘要[C];2010年

4 梁淑娟;魏海明;田志剛;;IFNa通過(guò)STAT3、STAT1信號(hào)通路上調(diào)NK細(xì)胞的殺傷活性[A];山東免疫學(xué)會(huì)、山東微生物學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)學(xué)會(huì)微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會(huì)、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會(huì)2001年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2001年

5 劉星光;姚鳴;李楠;王春梅;鄭媛媛;曹雪濤;;鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ通過(guò)結(jié)合并活化TAK1和IRF3加強(qiáng)巨噬細(xì)胞中TLR配體誘導(dǎo)的炎癥因子和Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

6 徐紅梅;安華章;侯晉;韓超峰;王品;于益芝;曹雪濤;;磷脂酶PTP1B抑制MyD88和TRIF依賴的巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子和Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 錢(qián)錚;日美:發(fā)現(xiàn)可防止肌體干擾素過(guò)剩的酶[N];中國(guó)勞動(dòng)保障報(bào);2006年

2 高飛;HIV感染機(jī)理研究獲新進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李霞;DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶Dnmt3a促進(jìn)Ⅰ型干擾素天然免疫應(yīng)答及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2014年

2 李姝;OTUB1和OTUB2對(duì)細(xì)胞抗病毒信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制[D];武漢大學(xué);2010年

3 舒揚(yáng);CDK5磷酸化DAI介導(dǎo)的神經(jīng)元Ⅰ型干擾素通路激活在帕金森病中的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2014年

4 李夏瑩;口蹄疫病毒VP1蛋白抑制細(xì)胞Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的分子機(jī)理[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 張靜;TRIM32調(diào)控病毒誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素表達(dá)的分子機(jī)制[D];武漢大學(xué);2013年

6 張曉明;Ⅰ型干擾素和分泌IL-10的B細(xì)胞對(duì)新生期炎癥反應(yīng)的負(fù)調(diào)控[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

7 占貞貞;磷酸酶PHLPP對(duì)TLR及RIG-I觸發(fā)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的選擇性調(diào)控作用及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 王延軼;WDR5在VISA信號(hào)復(fù)合物組裝及細(xì)胞抗病毒反應(yīng)中的作用機(jī)制[D];武漢大學(xué);2010年

9 毛愛(ài)平;cIAP1/2調(diào)控IFN-β誘導(dǎo)表達(dá)的分子機(jī)制[D];武漢大學(xué);2011年

10 楊瑩韻;干擾素誘導(dǎo)基因IFIT家族分子促進(jìn)Ⅰ型干擾素抗腫瘤作用及其機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

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1 張泉;豬腦心肌炎HB10株的3C蛋白酶對(duì)Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的影響[D];長(zhǎng)江大學(xué);2015年

2 武劍琴;人類細(xì)小病毒B19基因組NS1、VP1和VP2基因克隆及對(duì)宿主Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的影響研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

3 陳倩;大鯢Ⅰ型干擾素基因的克隆、表達(dá)與抗病毒活性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 王品;micro-RNAs對(duì)Ⅰ型干擾素免疫效應(yīng)的調(diào)控作用與相關(guān)機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 徐永妮;漢灘病毒感染HaCaT細(xì)胞誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素產(chǎn)生及其分子機(jī)制的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

6 許麗娜;鴨Ⅰ型干擾素基因的克隆及原核表達(dá)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

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