本文關(guān)鍵詞：梅毒包膜脂蛋白基因的克隆、表達及臨床抗體的檢測

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【摘要】：目的:克隆tp15、tp17、tp47、tp0453基因,構(gòu)建原核表達質(zhì)粒,進行蛋白的表達、純化并用于檢測梅毒病人血清抗體。方法:PCR擴增4個基因,構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET28a(+)/tp15、pET28a(+)/tp17、pGEX-6P-1/tp47和pGEX-6P-1/tp0453,經(jīng)雙酶切及測序鑒定,將獲得的陽性克隆轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導表達,對表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE電泳及Western blot分析鑒定,利用親和層析方法對4個蛋白進行純化。將四個純化的蛋白固定到NC膜上,利用immuno-slot blot方法對梅毒病人血清進行檢測。結(jié)果:經(jīng)鑒定表明成功構(gòu)建四個原核表達質(zhì)粒。SDS-PAGE電泳及Western blot分析結(jié)果顯示四個重組蛋白大小正確。immuno-slot blot實驗顯示四個蛋白能與梅毒病人血清特異性結(jié)合。結(jié)論:成功克隆、表達和純化了tp15、tp17、tp47、tp0453蛋白,四個蛋白可以與梅毒病人血清特異性結(jié)合,為進一步建立梅毒病人血清檢測試劑盒奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 三峽大學分子生物學研究所;
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 0引言梅毒是由梅毒螺旋體感染人體而發(fā)生的常見性傳播疾病,可累及全身各個器官且臨床表現(xiàn)千變?nèi)f化,侵襲力極強,已經(jīng)成為繼艾滋病后最為嚴重的性傳播疾病,嚴重危害到人類的身體健康[1]。隨著分子生物學的發(fā)展,我們發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體的外膜脂蛋白作為重要的刺激機體產(chǎn)生免疫應答的

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