發(fā)布時間：2017-11-08 13:10

  本文關(guān)鍵詞：膀胱平滑肌細胞條件培養(yǎng)液誘導臍帶MSCs向平滑肌細胞分化的實驗研究

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【摘要】：目的探討膀胱平滑肌細胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)條件培養(yǎng)液能否誘導臍帶MSCs(umbilical cord MSCs,UCMSCs)向平滑肌細胞(smooth muscle cells,SMCs)分化,為組織工程技術(shù)應用于泌尿系統(tǒng)修復重建尋找可供選擇的種子細胞。方法取足月新生兒臍帶和行膀胱全切術(shù)患者捐贈的正常膀胱組織,分別分離培養(yǎng)UCMSCs和BSMCs。收集第1~5代BSMCs的培養(yǎng)液,與完全培養(yǎng)基以1∶1比例配制成BSMCs條件培養(yǎng)液。取第3代UCMSCs作為誘導細胞,使用BSMCs條件培養(yǎng)液培養(yǎng)為誘導組(A組),完全培養(yǎng)基培養(yǎng)為對照組(B組),倒置顯微鏡觀察兩組細胞形態(tài)變化;另設(shè)單純BSMCs為陽性對照組(C組)。培養(yǎng)7、14 d,采用免疫熒光染色和Western blot檢測各組細胞中α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Calpon in、平滑肌肌球蛋白重鏈(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)的表達情況。結(jié)果誘導培養(yǎng)后,A組細胞逐漸變長,由短棒狀、多個突起逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)殚L梭形,與BSMCs形狀相似;B組細胞形態(tài)未見明顯變化。免疫熒光染色示,C組BSMCs中α-SMA、Calponin和SM-MHC均呈陽性表達。培養(yǎng)7 d,A、B組可見α-SMA呈陽性表達;14 d時,A組α-SMA陽性表達逐漸增多,B組無明顯變化。培養(yǎng)7 d,A組可見Calponin陽性表達,14 d時陽性表達明顯增多;B組各時間點均未見Calponin陽性表達。各時間點A、B組均未見SM-MHC陽性表達。Western blot檢測示各組細胞α-SMA、Calponin和SM-MHC蛋白表達情況與免疫熒光染色結(jié)果基本一致。結(jié)論 BSMCs條件培養(yǎng)液能誘導UCMSCs向SMCs分化,UCMSCs有望成為泌尿系統(tǒng)修復重建可供選擇的種子細胞之一。
【作者單位】： 四川大學華西醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(30901484、81200551、81270841)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 組織工程技術(shù)的發(fā)展為人類疾病治療帶來一種“理想”的治療模式[1]。干細胞具有較強多向分化潛能,是組織工程研究的理想種子細胞。其中MSCs是來自中胚層的干細胞,廣泛存在于骨髓、脂肪、肌肉、臍帶血、胎盤及臍帶等組織中[2-6]。目前研究較深入的是BMSCs,但存在細胞數(shù)量及增殖

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