發(fā)布時(shí)間：2017-11-05 15:24

  本文關(guān)鍵詞：人親磷脂酸磷脂酶A1基因的克隆與序列分析及真核表達(dá)載體的構(gòu)建

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【摘要】：目的克隆人親磷脂酸磷脂酶A1(PA-PLA1)基因,分析該酶基因及其蛋白質(zhì)的序列特征并構(gòu)建PA-PLA1基因真核表達(dá)載體,為該酶生理功能的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法從人的腎臟組織中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA。擴(kuò)增人PA-PLA1基因并克隆測(cè)序。以Vector NTI 8.0、DNASTAR、ORF finder分析所克隆的人PA-PLA1基因及其蛋白質(zhì)序列。構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1-PA-PLA1,測(cè)序證實(shí)后轉(zhuǎn)染小鼠分泌胰島素細(xì)胞株MIN6,以Western blotting檢測(cè)PA-PLA1蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果人PA-PLA1基因mRNA全長(zhǎng)為2 923 bp,編碼區(qū)長(zhǎng)2 238 bp,編碼1個(gè)由745個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白多肽。序列比對(duì)表明所克隆的人PA-PLA1基因與牛PA-PLA1基因同源,并與KIAA0725p和p125基因高度相似,三者在脂肪酶家族中形成亞家族,但KIAA0725p蛋白和p125蛋白具有常見的脂肪酶活性中心保守序列GX-S-XG,而PA-PLA1的該序列為SX-S-XG。真核表達(dá)載體pcDNA3.1-PA-PLA1構(gòu)建正確并在所轉(zhuǎn)染的MIN6細(xì)胞中過表達(dá)PA-PLA1蛋白。結(jié)論 PA-PLA1、KIAA0725p蛋白和p125蛋白在脂肪酶家族中形成亞家族,但PA-PLA1具有獨(dú)特的脂肪酶活性中心保守序列SX-S-XG。所構(gòu)建的PA-PLA1基因真核表達(dá)載體能在MIN6細(xì)胞中過表達(dá)小鼠PA-PLA1蛋白。該研究結(jié)果將為PA-PLA1生理功能的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院(醫(yī)藥生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室);
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No:NSFC30860094) 廣西自然科學(xué)基金(No:桂科自0991258)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 磷脂酸(phosphatidic acid,PA)是一種具有多種生物學(xué)功能的脂類信號(hào)分子。文獻(xiàn)表明[1],PA是激素、生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子重要的第二信使,通過活化多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的蛋白質(zhì)而在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、囊泡輸送和激素應(yīng)答等多種細(xì)胞過程發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。PA的產(chǎn)生主要通過兩種途徑,

【相似文獻(xiàn)】

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