發(fā)布時間：2017-10-30 07:11

  本文關(guān)鍵詞：鼠疫菌Fur蛋白對waaA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究

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【摘要】：目的從轉(zhuǎn)錄水平上研究鼠疫耶爾森菌Fur蛋白對waaA的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。方法提取鼠疫菌野生株(WT)和fur突變株(Δfur)的總RNA,采用引物延伸實驗研究waaA的轉(zhuǎn)錄起始位點,并根據(jù)產(chǎn)物的豐度判斷Fur蛋白對waaA的調(diào)控關(guān)系。構(gòu)建克隆有waaA上游啟動子區(qū)的LacZ重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入WT和Δfur中,通過測定β-半乳糖苷酶活性來比較兩株重組菌中的waaA啟動子活性,進(jìn)一步驗證Fur蛋白對waaA的調(diào)控關(guān)系。PCR擴增waaA啟動子區(qū)DNA序列全長,并純化鼠疫菌His-Fur蛋白,通過體外的凝膠阻滯實驗,即電泳遷移率變動實驗(EMSA)和DNaseⅠ足跡實驗驗證His-Fur蛋白對waaA啟動子區(qū)是否具有直接的結(jié)合作用。結(jié)果與結(jié)論 DNaseⅠ足跡實驗表明,Fur蛋白對waaA啟動子區(qū)的結(jié)合位置為-204至-150之間的堿基(翻譯起始位點為+1);引物延伸實驗顯示waaA有一個轉(zhuǎn)錄起始位點T(-26),且該位點的轉(zhuǎn)錄活性直接被Fur蛋白激活。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全國家重點實驗室;江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院;重慶醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與管理學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 鼠疫耶爾森菌 轉(zhuǎn)錄調(diào)控 Fur waaA
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(30930001)
【分類號】：R341
【正文快照】： 鼠疫耶爾森菌(鼠疫菌,Yersinia pestis)是烈性傳染病鼠疫的病原菌,人類通常被帶菌蚤體叮咬而被感染[1]。鼠疫菌在蚤體前胃中能形成生物膜而阻止血液流進(jìn)蚤胃中,使蚤時刻處于饑餓狀態(tài),導(dǎo)致蚤不斷叮咬宿主,從而不斷引起新的感染�？梢�,鼠疫菌的生物膜在鼠疫菌傳播過程中起著關(guān)

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本文編號：1116629