發(fā)布時間：2017-10-23 12:02

  本文關鍵詞：GGPPS基因干擾腺病毒載體的構建及鑒定

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【摘要】：構建GGPPS基因干擾腺病毒質粒載體并加以鑒定.根據(jù)GGPPS基因序列設計GGPPS干擾序列引物,定向克隆至穿梭載體pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位點,PmeⅠ酶切線性化的pShuttle-H1-SiGGPPS干擾質粒,并與腺病毒載體(pAdEasy-1質粒)共同轉化E.coli BJ5183感受態(tài)細菌,產(chǎn)生重組腺病毒載體.用PacⅠ酶切線性化的回收質粒,轉染293A細胞包裝腺病毒顆粒,在倒置顯微鏡下觀察細胞CPE,用TCID50法測定病毒顆粒的濃度,并初步觀察病毒感染PC12細胞對目的基因的干擾效率.經(jīng)酶切鑒定、測序證實成功構建GGPPS基因干擾腺病毒載體.包裝的腺病毒濃縮懸液滴度為1.995×107PFU/mL.GGPPS在人中具有保守性,該病毒能在人源的WRL-68細胞中成功表達,并且對GGPPS基因干擾效率達70%以上.
【作者單位】： 南京林業(yè)大學森林資源與環(huán)境學院江蘇省有害生物入侵與控制重點實驗室;南京大學醫(yī)學院江蘇省醫(yī)學分子技術重點實驗室;
【關鍵詞】： GGPPS基因 干擾 腺病毒
【基金】：國家自然科學青年基金(31100448) 博士點基金(2113204120004)
【分類號】：R341
【正文快照】： 香葉基香葉基焦磷酸合成酶(Geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPS),(GenBank Accession No.NM_010282),是短鏈異戊烯二磷酸合成酶家族的成員,可催化法尼基焦磷酸(Fanesyl pyrophosphate,FPP)與異戊烯焦磷酸(Isopenteny pyrophosphate,IPP)的縮合反應,產(chǎn)生由20個碳組成

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本文編號：1083279