本文關(guān)鍵詞：人外周血濾泡輔助T細(xì)胞的分選鑒定與功能檢測

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【摘要】：目的:探索分選、鑒定和檢測人外周血濾泡輔助T細(xì)胞(T follicular helper cells,Tfh)功能的方法。方法:使用密度梯度離心(density gradient centrifugation,DGC)、免疫磁珠分選(magnetic-activated cell sorting,MACS)和流式細(xì)胞儀(flow cytometry,FCM)分選法來分選人外周血Tfh細(xì)胞,分選后使用FCM檢測細(xì)胞純度和活性,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測細(xì)胞群的特異性轉(zhuǎn)錄因子B細(xì)胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma,Bcl)-6 mRNA的表達(dá),激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和表面分子CD4、CXCR5的表達(dá)及定位,鑒定后使用FCM進(jìn)行功能檢測。結(jié)果:①FCM檢測經(jīng)分選后Tfh細(xì)胞純度達(dá)(87.69±5.01)%,活性達(dá)(98.21±0.85)%,純度和分選前有顯著提高(P0.05)。②實(shí)時(shí)定量PCR檢測分選后的Tfh細(xì)胞群的Bcl-6 mRNA相對表達(dá)量顯著高于分選前(P0.05),分選后的Tfh細(xì)胞群具有高純度。③激光共聚焦顯微鏡觀察到分選后的Tfh細(xì)胞形態(tài)完整,CD4及CXCR5的熒光表達(dá)于細(xì)胞膜并可以融合。④FCM可檢測分選鑒定后Tfh細(xì)胞功能相關(guān)的表面分子PD-1、ICOS、CD40L的表達(dá)。結(jié)論:采用DGC+MACS+FCM,經(jīng)鑒定可以得到純度高、活性好的Tfh細(xì)胞,并可以開展其功能檢測。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院感染科;重慶醫(yī)科大學(xué)病毒性肝炎研究所;
【關(guān)鍵詞】： 濾泡輔助T細(xì)胞 細(xì)胞分選 細(xì)胞鑒定 細(xì)胞功能檢測
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:0318,30930082) 國家科技重大專項(xiàng)資助項(xiàng)目(編號:2008ZX10002-006、2012 ZX10002007) 重慶市科委資助項(xiàng)目(編號:CSTC2012gg-yyjsB10007)
【分類號】：R392
【正文快照】： 濾泡輔助T細(xì)胞(T follicular helper cells,Tfh)是目前基礎(chǔ)免疫學(xué)的研究熱點(diǎn),最初由Schaerli等[1]在2000年報(bào)道,這群細(xì)胞在其特異性轉(zhuǎn)錄因子B細(xì)胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma,Bcl)-6的作用下[2],從原始Th細(xì)胞分化而成,并且持續(xù)高表達(dá)表面分子CXCR5,與B細(xì)胞在淋巴濾泡相遇并相

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本文編號：1070519