本文關鍵詞：藍氏賈第鞭毛蟲穩(wěn)定表達載體的構建

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【摘要】：目的構建藍氏賈第鞭毛蟲基因的穩(wěn)定表達載體。方法以本實驗室構建的pGL gdh-Neo為基礎,在gdh5′UTR端ApaⅠ酶切位點前插入藍氏賈第鞭毛蟲磷酸丙糖異構酶(tim)基因以方便載體與賈第蟲基因組整合,得到pGLtim-gdh-Neo;設計含有16個酶切位點的多克隆位點區(qū)(MCS)并將其置于α2-Tubulin啟動子調控下,使成為一個完整表達框,合成該表達框并單酶切插入重組質粒pGL tim-gdh-Neo的ApaⅠ位點,獲得重組穩(wěn)定表達質粒載體pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo。在MCS區(qū)插入Luc驗證其有效性,以pTAL-Luc質粒為模板,擴增Luc基因序列,純化后將其插入EcoRⅤ單酶切的pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo多克隆位點區(qū),重組質粒線性化后轉染蟲體,并對G418篩選獲得的Luc賈第蟲重組株進行熒光素酶活性檢測。結果構建了可穩(wěn)定轉染,帶有多克隆位點區(qū)及Neo抗性基因的重組表達載體pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo,其長度為5 395bp;Luc重組質粒pGL tim-Tub-Luc-gdh-Neo可穩(wěn)定轉染至賈第蟲并表達熒光素酶。結論成功構建了藍氏賈第鞭毛蟲穩(wěn)定表達載體pGL tim-Tub-MCS-gdh-Neo。
【作者單位】： 大連大學醫(yī)學研究中心分子生物學實驗室;大連大學環(huán)化學院;
【關鍵詞】： 藍氏賈第鞭毛蟲 α-微管蛋白 磷酸丙糖異構酶 穩(wěn)定表達載體
【基金】：國家自然科學基金項目(No.30872207,30901253)
【分類號】：R382.21
【正文快照】： 藍氏賈第鞭毛蟲(Giardia lamblia)簡稱賈第蟲,為人體致病性原蟲,可導致腹瀉、營養(yǎng)吸收不良綜合征及兒童生長障礙。該病呈全球性分布,是發(fā)達國家中最常見的人體腸道寄生蟲病,被世界衛(wèi)生組織列為全世界危害人類健康的10種主要寄生蟲病之一[1]。賈第蟲屬于真核生物的早期分支,這

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本文編號：1051723