發(fā)布時間：2017-10-05 10:44

  本文關鍵詞：MSC調控DCs對ARDS小鼠肺部炎癥反應影響的研究

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【摘要】：目的：驗證MSC通過調控DCs減輕ARDS小鼠肺部炎癥反應。方法：C57BL/6小鼠64只,隨機(隨機數字法)分為①對照組：小鼠氣道內注射與LPS等體積的NS,30min后尾靜脈注射與MSC等體積的PBS;②ARDS組：小鼠氣道內注射LPS 5mg/kg復制ARDS模型,30mmin后尾靜脈注射與MSC等體積的PBS;③MSC組：小鼠氣道內注射LPS 5mg/kg復制ARDS模型,30mmin后尾靜脈注射MSC(100,000個細胞重懸于100 μl PBS); ④Creg組：小鼠氣道內注射LPS 5mg/kg復制ARDS模型,30min后尾靜脈注射DCreg(100,000個細胞重懸于100 μl PBS)。 6h和24h后處死小鼠,留取肺、脾臟、血液檢測：(1)小鼠肺DCs的數量及成熟狀態(tài)檢測：流式細胞法(FCM)檢測肺單細胞懸液中DCs數量及DCs表達CD11c、CDllb、MHCⅡ和CD40的水平。(2)小鼠脾臟DCs的數量、成熟狀態(tài)及功能檢測：FCM檢測脾臟單細胞懸液中DCs數量及DCs表達CDllc、CD11b、MHCⅡ和CD40的水平;FITC-葡聚糖法檢測脾臟DCs的吞噬功能；混合淋巴細胞培養(yǎng)檢測脾臟DCs誘導T淋巴細胞增殖能力。(3)小鼠肺損傷程度檢測：HE染色行肺組織病理學檢查并行肺損傷評分評價肺損傷嚴重程度；計算肺濕重／體重比評價肺水腫程度；伊文思藍實驗評價肺血管內皮通透性。(4)小鼠肺和全身炎癥反應檢測：計算肺泡灌洗液中有核細胞總數和中性粒細胞計數評價炎癥細胞的浸潤程度；ELISA法檢測肺組織勻漿和血清中IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ、TGF-β的濃度評價肺部和全身炎癥反應。結果：(1)MSC能夠抑制肺DCs的數量和成熟狀態(tài)：與ARDS組比較,MSC組肺DCs比例在6h后有下降趨勢(1.54±0.09)%,在24h后較ARDS組顯著下降(1.814±0.2)%(p0.05)；與ARDS組比較,MSC組肺DCs表達CDllc、CD11bMHCII和CD40水平在24h均顯著降低(p0.05)。(2)MSC能夠抑制脾臟DCs的數量、成熟狀態(tài)和免疫原性,增強脾臟DCs的吞噬能力：與ARDS組比較,MSC組脾臟DCs比例6h顯著下降(2.02+0.15)%(p0.05),24h脾臟DCs進一步降至(1.29±0.07)%；與ARDS組比較,MSC組肺DCs表達CD11c、CD11b、MHCⅡ和CD40的水平在6h和24h均顯著降低(p0.05); ARDS組與MSC組脾臟DCs在6h的吞噬功能無統計學差異(p0.05),在24h點MSC組脾臟DCs的吞噬功能較ARDS組顯著增加(p0.05),誘導T淋巴細胞增殖的能力較ARDS組顯著下降(p0.05),該脾臟DCs符合DCreg特性,說明MSC能誘導脾臟DCreg的生成。(3) DCreg和MSC可降低LPS誘導的ARDS小鼠肺部和全身炎癥反應：與ARDS組比較,DCreg和MSC在6h、24h均可顯著減輕BALF中有核細胞總數、中性粒細胞數,同時能有效降低肺組織和血清促炎介質IL-4. IL-17水平,并增加抗炎介質IL-10、IFN-γ和TGF-β水平(p0.05)。(4) DCreg和MSC減輕LPS誘導的ARDS小鼠肺損傷：與ARDS組比較,DCreg和MSC在6h和24h均可顯著減輕肺病理損傷、降低肺損傷評分、減少肺濕重／體重比、降低肺微血管內皮對伊文思藍的通透性(p0.05)。結論：MSC通過抑制DCs的數量和成熟狀態(tài)、同時誘導DCreg的生成減輕ARDS小鼠肺部炎癥反應。
【關鍵詞】：間充質干細胞 急性呼吸窘迫綜合征 樹突狀細胞 調節(jié)性樹突狀細胞
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 縮略詞表10-12
• 前言12-17
• 參考文獻15-17
• 文獻綜述17-23
• 參考文獻21-23
• 主要實驗儀器與試劑23-26
• 引言26-27
• 實驗方法27-42
• 結果42-65
• 討論65-70
• 參考文獻70-73
• 結論73-74
• 已發(fā)表論文74-75
• 作者簡介75-76
• 致謝76

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