發(fā)布時間：2017-09-27 10:31

  本文關(guān)鍵詞：酸性鞘磷脂酶在二氧化硅致肺纖維化體外模型中的作用

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【摘要】：摘要：目的觀察酸性鞘磷脂酶(ASM)在二氧化硅(Si02)致小鼠胚肺成纖維細胞(NIH3T3)纖維化過程中的變化及規(guī)律,探討ASM在Si02致肺纖維化體外模型中的作用。方法ACP染色法檢測小鼠原代巨噬細胞(PAM)細胞純度；雞紅細胞吞噬實驗測定PAM和小鼠胚胎巨噬細胞(RAW.264.7)的吞噬功能；收集SiO2刺激RAW.264.7和PAM細胞培養(yǎng)上清,ELISA法測定其IL-8、TNF-α及TGF-β1的分泌情況；SiO2采用三種方式對NIH3T3進行染毒：(1)SiO2直接刺激組,200mg/LSiO2粉塵直接刺激NIH3T3(2) SiO2間接刺激組,收集200mg/LSiO2粉塵刺激PAM12h的培養(yǎng)上清再刺激NIH3T3(3) ASM抑制劑組,在間接刺激組的基礎(chǔ)上加入ASM抑制劑。按上述三種刺激方式6,12,18,24,36和48h后收集細胞樣品。高效液相色譜法測定NIH3T3細胞內(nèi)的ASM活性；消化法測定細胞內(nèi)羥脯氨酸(HYP)含量；Van Gieson膠原纖維染色法對NIH3T3細胞內(nèi)膠原纖維進行染色；Western印跡法測定細胞內(nèi)膠原Ⅲ的表達。結(jié)果PAM細胞吞噬功能及分泌白細胞介素8(IL-8)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)活性較RAW.264.7高；SiO2刺激PAM12h,培養(yǎng)上清中IL-8. TGF-β1及腫瘤壞死因子.-α (TNF-α)的分泌中明顯增加(P0.01)；直接刺激組中,NIH3T3細胞內(nèi)ASM活性在36h明顯增加而其他時間點無變化,HYP含量在48h明顯增加而其他時間點無變化,膠原染色在36h及48h可見紅染的膠原纖維但其他時間點無變化,膠原Ⅲ表達在各個時間點表達變化均不明顯；間接刺激組中,隨著PAM上清作用時間延長,NIH3T3細胞內(nèi)ASM活性、HYP含量、膠原Ⅲ表達均呈升高的趨勢,膠原纖維染色隨著PAM上清作用時間延長紅染的膠原纖維也越多。ASM抑制劑組中,隨著PAM上清作用時間延長,NIH3T3細胞內(nèi)ASM活性、HYP含量、膠原Ⅲ表達均降低,膠原纖維染色無明顯變化。結(jié)論本實驗條件下,ASM在SiO2致肺纖維化的形成中有重要作用,抑制ASM活性可以有效抑制NIH3T3細胞纖維化的形成。圖11幅,表6個,參考文獻65篇
【關(guān)鍵詞】：酸性鞘磷脂酶 二氧化硅 肺纖維化 巨噬細胞
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 英文~.略表9-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 材料與方法14-21
• 2.1 材料14-16
• 2.1.1 受試細胞及動物14
• 2.1.2 受試物14
• 2.1.3 主要試劑14
• 2.1.4 主要試劑溶液的配置14-15
• 2.1.5 主要儀器15-16
• 2.2 方法16-21
• 2.2.1 實驗技術(shù)路線16
• 2.2.2 小鼠RAW.264.7及NIH3T3細胞培養(yǎng)16
• 2.2.3 小鼠原代肺泡巨噬細胞收集和純度測定(ACP染色法)16-17
• 2.2.4 兩種類型巨噬細胞吞噬率測定(雞紅細胞吞噬率實驗)17
• 2.2.5 細胞存活率測定(MTT法)17-18
• 2.2.6 細胞因子IL-8,TNF-α及TGF-β1的測定(ELISA法)18
• 2.2.7 SiO_2刺激PAM上清液的獲取18-19
• 2.2.8 NIH3T3細胞的分組處理19
• 2.2.9 NIH3T3細胞內(nèi)ASM活性檢測(高效液相色譜法)19
• 2.2.10 NIH3T3細胞內(nèi)羥脯氨酸(HYP)含量測定(消化法)19-20
• 2.2.11 NIH3T3細胞膠原纖維染色(Van Gieson染色法)20
• 2.2.12 NIH3T3細胞內(nèi)膠原Ⅲ表達測定(Western蛋白印跡法)20
• 2.2.13 統(tǒng)計分析20-21
• 第三章 結(jié)果21-32
• 3.1 PAM細胞純度測定21
• 3.2 RAW.264.7和PAM吞噬功能及分泌功能的比較21-23
• 3.2.1 SiO_2對RAW.264.7與PAM存活率的影響21-22
• 3.2.2 SiO_2 R AW.264.7與PAM吞噬功能的比較22
• 3.2.3 SiO_2對RAW.264.7與PAM分泌IL-8及TGF-β1的比較22-23
• 3.3 SiO_2對PAM分泌IL-8,TNF-α及TGF-β1的時間效應23-24
• 3.4 地昔帕明抑制劑濃度的選擇24-25
• 3.4.1 不同濃度地昔帕明對NIH3T3細胞毒性測定24-25
• 3.4.2 不同濃度地昔帕明對ASM活性抑制程度測定25
• 3.5 SiO_2對NIH3T3細胞內(nèi)ASM活性影響及地昔帕明的干預作用25-27
• 3.6 SiO_2對NIH3T3細胞分泌HYP的影響及地昔帕明的干預作用27-28
• 3.7 SiO_2對NIH3T3細胞膠原纖維表達的影響及地昔帕明的干預作用28-30
• 3.8 SiO_2對NIH3T3細胞膠原Ⅲ表達的影響及地昔帕明的干預作用30-31
• 3.9 NIH3T3細胞內(nèi)ASM與羥脯氨酸及膠原Ⅲ表達相關(guān)性分析31-32
• 第四章 討論32-38
• 4.1 兩種類型巨噬細胞吞噬功能和反應活性的比較與選擇32-34
• 4.2 SiO_2誘導PAM細胞分泌IL-8,TNF-α及TGF-β1影響34-35
• 4.3 SiO_2對NIH3T3細胞內(nèi)ASM活性影響35
• 4.4 SiO_2對NIH3T3細胞纖維化的影響35-36
• 4.5 SiO_2致NIH3T3細胞纖維化形成與ASM的關(guān)系36-38
• 第五章 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-44
• 綜述44-53
• 參考文獻48-53
• 致謝53-54
• 研究生期間的成績54

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 金豐;蔣盛威;曾明;何興軒;Edward H SCHUCHMAN;王安;羅磊;王傅;肖芳;關(guān)嵐;劉新民;鐘才高;;酸性鞘磷脂酶在二氧化硅致小鼠胚肺成纖維細胞纖維化體外模型中的作用[J];中國藥理學與毒理學雜志;2014年02期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王寶中;IL-17A在放射性肺損傷中的表達及其作用的研究[D];山東大學;2014年

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本文編號：929189