發(fā)布時間：2017-09-21 02:33

  本文關鍵詞：HGF基因修飾的間充質干細胞治療閉塞性細支氣管炎的實驗研究

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【摘要】：同種異體移植已經(jīng)成為血液系統(tǒng)惡性病的主要治療方法,盡管新的治療方法和免疫抑制劑的使用對于感染并發(fā)癥有很好的控制作用,但肺部并發(fā)癥仍是造血干細胞移植后發(fā)病率和死亡率高的主要原因。閉塞性細支氣管炎(Bronchiolitis obliterans syndrome,BOS)是一種嚴重的、非感染性的、致命的肺部并發(fā)癥。其發(fā)病機制可能與慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)相關,目前尚無有效治療手段,因此,研發(fā)新的治療策略具有重要意義。近年的研究發(fā)現(xiàn),肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor,HGF)是一種多功能生長因子。在博來霉素誘導的肺纖維化動物模型中,通過抑制轉化生長因子-1(Transformating growth factor-beta1,TGF-β1)的分泌,發(fā)揮抗纖維化、抗炎的作用,調節(jié)上皮細胞和間質細胞的轉化,減少纖維蛋白的沉積。但是,HGF蛋白的半衰期短,需要多次給藥,靜脈給藥不能大量進入肺組織,因而不能更好地發(fā)揮效能。間充質干細胞(Mesenchymal stem cells,MSC)作為一種多能干細胞,不僅具有免疫調節(jié)和多向分化潛能,還具有相對的定位歸巢作用,容易歸巢到炎癥、損傷部位。本課題組前期試驗證實重組腺病毒-肝細胞生長因子(Recombinant adenovirus with HGF,Ad-HGF)修飾可使人臍帶間充質干細胞(Umbilical Cord Mesenchymal stem cells,UCMSC)可高表達HGF,延長UCMSC在小鼠體內存活時間,增強UCMSC的免疫調節(jié)作用,有效治療放射性肺損傷和腸損傷。基因修飾的干細胞因具有干細胞治療和基因治療的雙重優(yōu)勢,在基因生物治療領域已得到廣泛的認同及關注。本實驗采用HGF基因修飾的UCMSC治療閉塞性細支氣管炎,觀察移植氣管病理學變化,計算移植氣管的阻塞率,評估HGF基因修飾的UCMSC對防治閉塞性細支氣管炎的療效,通過檢測移植氣管組織及血清中炎性因子的表達、脾臟中淋巴細胞表型的變化來研究基因修飾細胞的作用機制。首先,按hertz等人建立的方法建立了小鼠異位氣管移植模型。為評價msc在bos小鼠體內的定植分布情況,我們分離、培養(yǎng)及鑒定egfp轉基因小鼠的骨髓間充質干細胞(mousebonemarrowmesenchymalstemcells,bmsc)后,建立異種氣管異位移植的bos小鼠模型。待小鼠蘇醒后,通過尾靜脈輸注經(jīng)150moiad-null或ad-hgf感染的mbmsc(1×106細胞/200μl),在注射后不同的時間點,眼球取血,對移植氣管、重要臟器進行取材并提取基因組dna,通過實時定量pcr(real-timequantitativepcr,q-pcr)的方法檢測egfp基因在bos小鼠體內的表達情況。將經(jīng)150moiad-null或ad-hgf感染的ucmsc細胞作為治療用細胞,經(jīng)尾靜脈輸注于bos模型鼠(1×106細胞/200μl),對照組輸注200μl生理鹽水(normalsaline,ns),通過設立不同時間點及組別,收集移植氣管固定后進行石蠟包埋、切片、he染色,觀察移植氣管纖維結締組織的增生及炎性細胞浸潤等病理形態(tài)變化,從而評價ucmsc對小鼠bos的治療作用及hgf基因修飾對療效的影響。此外,應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)和q-pcr的方法,檢測了血液及移植局部炎癥因子及抗炎因子的表達,通過流式細胞術檢測脾臟淋巴細胞表型改變。研究結果表明,bmsc移植后可以歸巢并定植于移植氣管損傷局部、血液、肝臟、肺等組織器官,hgf基因修飾可以促進bmsc的定植并延長其定植時間。mscs-hgf及mscs-null治療可以明顯減輕移植氣管內纖維結締組織的增生、上皮細胞的壞死、脫落、缺失、炎細胞的浸潤、氣管環(huán)的破壞等bos典型的病理變化,hgf基因修飾組作用優(yōu)于mscs-null組。mscs-hgf治療后炎性細胞因子γ-干擾素(gamainterferon,ifn-?)表達降低,抗炎細胞因子白介素-4(interleukin4,il-4)和白介素-10(interleukin10,il-10)的表達升高,同時促纖維化因子tgf-?1的表達水平降低。此外,細胞治療后降低了由氣管移植所誘導的脾臟淋巴細胞treg,th1/th2,th17的升高趨勢,細胞免疫表型改變明顯改善。上述研究表明,HGF修飾的臍帶間充質干細胞可以防止氣管移植相關的氣道纖維增生性病變,可通過調節(jié)炎癥及纖維化的進程而發(fā)揮作用。本實驗為HGF基因修飾UCMSC的臨床轉化提供了新的實驗數(shù)據(jù),為BOS提供了新的治療策略。
【關鍵詞】：閉塞性細支氣管炎 臍帶間充質干細胞 肝細胞生長因子 調節(jié)性T細胞 輔助性T淋巴細胞 造血干細胞移植
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R562.21
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮寫11-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-32
• 結果32-35
• 附圖35-43
• 附表43-45
• 討論45-48
• 結論48-49
• 參考文獻49-54
• 綜述54-64
• 參考文獻59-64
• 致謝64-65
• 個人簡歷65-66

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本文編號：891879