本文關(guān)鍵詞：miR-29b在特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化中的抗纖維化作用

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【摘要】：前言特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種原因不明、出現(xiàn)在成人、局限于肺、進(jìn)行性致纖維化的間質(zhì)性肺炎。肺泡上皮細(xì)胞的損傷,導(dǎo)致上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)發(fā)生,可使細(xì)胞外基質(zhì)蛋白(extracellular matrix,ECM)大量產(chǎn)生增多,導(dǎo)致ECM過度積聚,,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化發(fā)生和肺功能受損。micro RNA-29b(mi R-29b)是一個(gè)與纖維化疾病緊密相關(guān)的mi RNA,在多器官臟器纖維化調(diào)控中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。mi R-29b可直接抑制多種膠原蛋白表達(dá),參與包括TGF-β/Smad在內(nèi)的多條與EMT相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控,在ECM的異常積聚所導(dǎo)致的纖維化中扮演著不可或缺的重要作用。提示mi R-29b具有阻止纖維化發(fā)生發(fā)展的可能性,具有一定程度的抗纖維化潛能。本研究通過將mi R-29b的類似物(mimic)轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的人肺泡上皮細(xì)胞中,探討上調(diào)mi R-29b表達(dá)對(duì)肺泡上皮細(xì)胞中EMT發(fā)生發(fā)展的影響。方法1.體外培養(yǎng)人胚肺泡上皮細(xì)胞2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)檢測mi R-29b表達(dá)水平,以及細(xì)胞上皮(E-cad)和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(α-SMA和COL1A1)的m RNA表達(dá)水平3.Western blot方法檢測Smad3蛋白及其磷酸化(p-Smad3)的表達(dá),以及細(xì)胞上皮(E-cad)和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(α-SMA和COL1A1)的蛋白表達(dá)4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以SX±表示,各組之間采用單因素方差分析,兩組之間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.TGF-β1誘導(dǎo)組細(xì)胞由正常的鵝卵石形或多角形轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮�、紡錘形,細(xì)胞間連接變松散,呈現(xiàn)間充質(zhì)細(xì)胞形態(tài);mi R-29b轉(zhuǎn)染組細(xì)胞形態(tài)對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組細(xì)胞形態(tài)有明顯改變,呈現(xiàn)類似鵝卵石形或多角形上皮形態(tài),而NC組細(xì)胞形態(tài)仍呈間充質(zhì)細(xì)胞形態(tài),對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組無明顯變化。2.與空白對(duì)照組比較,TGF-β1誘導(dǎo)組E-cad m RNA表達(dá)顯著下降,α-SMA和COL1A1 m RNA表達(dá)顯著升高,提示經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)發(fā)生EMT。與TGF-β1誘導(dǎo)組比較,mi R-29b轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染mi R-29b mimic 48h后,mi R-29b表達(dá)升高(P0.05)。E-cad m RNA表達(dá)升高,α-SMA和COL1A1 m RNA表達(dá)下降,對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);而NC組E-cad、α-SMA和COL1A1 m RNA表達(dá)無明顯變化,對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.與空白對(duì)照組比較,TGF-β1誘導(dǎo)組的E-cad蛋白表達(dá)明顯減少,磷酸化Smad3蛋白(p-Smad3)、α-SMA和COL1A1蛋白表達(dá)明顯增高,提示經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)發(fā)生EMT;與TGF-β1誘導(dǎo)組比較,mi R-29b轉(zhuǎn)染組的E-cad蛋白表達(dá)增高,p-Smad3、α-SMA和COL1A1蛋白表達(dá)減少,對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);而NC組E-cad、p-Smad3、α-SMA和COL1A1蛋白表達(dá)無明顯變化,對(duì)比TGF-β1誘導(dǎo)組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論mi R-29b表達(dá)水平上調(diào),可對(duì)發(fā)生EMT的IMR-90細(xì)胞中TGF-β/Smad信號(hào)通路產(chǎn)生一定程度的抑制作用,顯示了mi R-29b具有抗纖維化潛能。
【關(guān)鍵詞】：miR-29b 特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化 轉(zhuǎn)化生長因子β1 Smad3
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞11-12
• 1 前言12-15
• 2 實(shí)驗(yàn)材料15-20
• 3 實(shí)驗(yàn)方法20-28
• 4 結(jié)果28-33
• 5 討論33-38
• 6 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-65
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡歷及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 梁艷;王皓;楊再興;仲人前;;上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在纖維化疾病中的研究進(jìn)展[J];中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2013年08期

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本文編號(hào)：834715