本文關(guān)鍵詞：PSP相關(guān)基因鑒別診斷策略的研究

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【摘要】：目的：原發(fā)性自發(fā)性氣胸(PSP)是一種較常見的呼吸系統(tǒng)急診,易反復(fù)發(fā)作,其病因尚不明確。FLCN基因突變能引起B(yǎng)HD綜合征(BHDS),典型的BHDSI臨床癥狀包括皮膚損傷、PSP以及腎癌,也可以僅有PSP表型,約11%的PSP患者是由FLCN基因突變引起的。目前BHDS診斷存在兩方面問題。第一,臨床表型鑒別診斷：BHDS患者肺部表型(PSP)一般早發(fā)于皮膚損傷和腎癌。如何從肺部臨床表型篩選出BHDS疑似患者以縮小需要做FLCN基因測序的PSP人群范圍?第二,基因診斷方法：FLCN基因突變類型復(fù)雜,包括小片段缺失／插入、剪切位點突變、無義突變以及基因內(nèi)大片段缺失／插入等多種突變類型。要檢測這些突變必須分別采用兩種不同的測序技術(shù)。其中小片段缺失／插入、剪切位點突變、無義突變需要通過Sanger測序方法檢測,基因內(nèi)大片段缺失／插入需要利用MLPA檢測。這兩類方法雖然具有較高的特異性,但是通量不高且成本不低。加之Marfan綜合征、肺淋巴管肌瘤病、ED綜合征、高胱氨酸尿癥以及α1-抗胰蛋白酶缺乏癥等臨床疾病都有氣胸表型。這些疾病的非典型性病例均可以氣胸為首發(fā)臨床表型,難與普通性氣胸區(qū)分,易被誤診為單純性PSP,而忽視其他更嚴(yán)重的潛在表型。因此有必要對相關(guān)致病基因進(jìn)行測序以排除或確診相關(guān)綜合征的存在。方法：為解決第一個問題,選取2010年3月至2014年5月在三家醫(yī)院的133例PSP住院患者進(jìn)行前瞻性實驗。將有氣胸家族史,或者有中下肺大泡列為篩選指標(biāo),標(biāo)記BHDS疑似患者。接著對所有患者進(jìn)行Sanger測序和MLPA分析,驗證篩選指標(biāo)的特異性和靈敏度。為解決第二個問題,課題組擬對PSP患者引入一種新的測序方法—-target-enrichment sequencing(目標(biāo)基因捕獲測序技術(shù))——進(jìn)行回顧性研究。我們選出7個(包括FLCN)與PSP相關(guān)臨床綜合征的致病基因,選取30例經(jīng)FLCN基因突變分析(Sanger測序以及MLPA)的氣胸患者。其中有20例檢測有FLCN基因突變,這些突變包括所有已知類型(小片段缺失／插入、剪切位點突變、無意突變和基因內(nèi)大片段缺失／插入)。2例(F294和F105)依據(jù)臨床癥狀診斷為肺淋巴管肌瘤病,3例(F736、F250和F266)臨床癥狀疑似BHDS,1例(F646)確診為Marfan綜合征,4例(F350、F602、F619和F978)為單純性PSP。結(jié)果：第一,133例PSP患者中,有41例被標(biāo)記為BHDS疑似患者——3例有家族史,39例有中下肺大泡(包括1例有家族史)。經(jīng)Sanger測序和MLPA分析檢測到14例FLCN基因突變。其中12例有中下肺大泡(包括1例有家族史)屬于BHDS疑似患者標(biāo)記組；另2例為上肺大泡,無中下肺大泡且無家族史。此方法靈敏度Se=30.8%,特異度Sp-97.9%。第二,27例樣本中,目標(biāo)基因捕獲測序技術(shù)檢測結(jié)果與Sanger測序和MLPA檢測到FLCN基因突變的結(jié)果一致,無一漏檢,且未發(fā)現(xiàn)Sanger測序和MLPA沒有檢測到的突變；其它基因還發(fā)現(xiàn)1例TSC1基因的剪切位點突變(F350,臨床上未被診斷為LAM)以及1例FBN1基因的無意突變(F646,臨床上已被診斷為MFS)。結(jié)論：第一,本次前瞻性實驗具有一定的靈敏度,以及很高的特異度。提示從肺部臨床表型(有中下肺大泡)鑒別診斷BHDS疑似患者,可以有效地縮小需要做FLCN基因檢測的PSP人群范圍。第二,本課題初步探索了目標(biāo)基因捕獲測序技術(shù)在PSP相關(guān)臨床綜合征的基因診斷應(yīng)用。目標(biāo)基因捕獲測序技術(shù)準(zhǔn)確度高,能檢測各種突變類型；在FLCN突變的臨床檢驗,該技術(shù)可以代替兩種傳統(tǒng)測序技術(shù)(Sanger測序和MLPA分析)；還可以同時對其它與PSP相關(guān)的基因進(jìn)行測序,其性價比較高。因此該實驗策略將有效地用于PSP相關(guān)基因的鑒別診斷。
【關(guān)鍵詞】：原發(fā)性自發(fā)性氣胸 臨床表型 目標(biāo)基因捕獲測序技術(shù) 基因診斷
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R440;R561.4
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 縮略詞10-11
• 第一章 緒論 PSP相關(guān)臨床綜合征的遺傳學(xué)分析11-22
• 第一節(jié) 氣胸的簡介與分類11-13
• 第二節(jié) 與PSP相關(guān)臨床綜合征的簡介13-22
• 第二章 前瞻性在PSP患者中鑒別診斷BHDS22-25
• 第一節(jié) 前言22
• 第二節(jié) 材料與方法22
• 第三節(jié) 前瞻性實驗方案22-23
• 第四節(jié) 結(jié)果23
• 第五節(jié) 討論23-25
• 第三章 PSP相關(guān)致病基因的目標(biāo)基因捕獲測序25-38
• 第一節(jié) 前言25-27
• 第二節(jié) 實驗方案設(shè)計27
• 第三節(jié) 材料與方法27-28
• 第四節(jié) 實驗步驟28-35
• 第五節(jié) 結(jié)果35-37
• 第六節(jié) 討論37-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 致謝45-46
• 附錄46-54

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本文編號：778337