本文關(guān)鍵詞：茶堿通過(guò)抑制NF-κB活性而減輕過(guò)氧化氫暴露下骨骼肌細(xì)胞的炎癥

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【摘要】：目的觀察茶堿對(duì)過(guò)氧化氫暴露下C2C12小鼠成肌細(xì)胞(C2C12細(xì)胞)炎癥的抑制作用。方法 (1)觀察不同濃度過(guò)氧化氫(H2O2)和茶堿對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：以C2C12細(xì)胞為研究對(duì)象,細(xì)胞分化成熟后使用終濃度分別為0.1mmol/L、 0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L和0.8mmol/L的H2O2,和終濃度分別為1 mol/L、0.1 mol/L、0.01 mol/L、0.001 mol/L和0.0001 mol/L的茶堿干預(yù)細(xì)胞24h,進(jìn)一步采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法確定對(duì)C2C12細(xì)胞的合適藥物濃度。(2)觀察茶堿是否能下調(diào)過(guò)氧化氫暴露下C2C12細(xì)胞內(nèi)核因子-κB(NF-κB)的表達(dá)和炎癥介質(zhì)釋放：將分化好的細(xì)胞分為空白對(duì)照組、過(guò)氧化氫組(過(guò)氧化氫干預(yù)細(xì)胞24小時(shí))、茶堿組(茶堿干預(yù)細(xì)胞24小時(shí))、過(guò)氧化氫+茶堿組(過(guò)氧化氫和茶堿共同干預(yù)細(xì)胞24小時(shí))、吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)+過(guò)氧化氫組。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELIS A)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清白細(xì)胞介素-8(IL-8)口腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的含量,實(shí)時(shí)熒光定量聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-κB mRNA相對(duì)表達(dá)量的情況,蛋白印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-κB蛋白的表達(dá)情況,凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)NF-κB活性。數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 (1)選擇濃度為0.4%的過(guò)氧化氫和0.001 mol/L的茶堿對(duì)C2C12細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。(2)茶堿對(duì)炎癥因子(IL-8、TNF-α)的影響：過(guò)氧化氫組細(xì)胞上清液炎癥因子(IL-8、TNF-α)含量明顯高于空白對(duì)照組及茶堿組(P0.05),茶堿+過(guò)氧化氫組IL-8、TNF-α較過(guò)氧化氫組減少(P0.05)；PDTC+過(guò)氧化氫組炎癥因子(IL-8、TNF-a)明顯低于過(guò)氧化氫組(P0.05)。(3)茶堿對(duì)NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響：過(guò)氧化氫組NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組及茶堿組(P0.05),茶堿+過(guò)氧化氫組NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量較過(guò)氧化氫組減少(P0.05); PDTC+過(guò)氧化氫組NF-κB的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯低于過(guò)氧化氫組(P0.05)。(4)茶堿對(duì)NF-κB蛋白表達(dá)量的影響：過(guò)氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組及茶堿組(P0.05),茶堿+過(guò)氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量較過(guò)氧化氫組減少(P0.05)；PDTC+過(guò)氧化氫組NF-κB蛋白表達(dá)量明顯低于過(guò)氧化氫組(P0.05)。(5)茶堿對(duì)NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性的影響：過(guò)氧化氫組NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性明顯高于空白對(duì)照組及茶堿組(P0.05),茶堿+過(guò)氧化氫組NF-κB細(xì)胞核內(nèi)活性較過(guò)氧化氫組減少(P0.05),較PDTC+過(guò)氧化氫組升高(P0.05); PDTC+過(guò)氧化氫組NF-κ B細(xì)胞核內(nèi)活性明顯低于過(guò)氧化氫組(P0.05)。結(jié)論 茶堿可以下調(diào)過(guò)氧化氫暴露下C2C12小鼠成肌細(xì)胞內(nèi)N F-κB的活性,減少IL-8和TNF-α的釋放,抑制骨骼肌細(xì)胞炎癥。
【關(guān)鍵詞】：氧化應(yīng)激 核因子-κB 骨骼肌炎癥
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R563.9
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 主要縮略詞表5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-46
• 討論46-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 綜述57-74
• 參考文獻(xiàn)64-74
• 致謝74-76
• 2013年-2016年攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文76

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1 樸春麗;于淼;姜U，

本文編號(hào)：590484