本文關鍵詞：Ac-SDKP調節(jié)α-Ac-Tub對矽肺纖維化的抑制作用及其機制

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【摘要】：第一部分α-Ac-Tub在人體(煤)矽肺標本中的表達及其病理學意義目的:觀察與分析α-Ac-Tub在人體(煤)矽肺標本中表達及其臨床病理學的意義。方法:1(煤)矽肺患者樣本來自于59例尸檢病例,年齡最小30歲,最大77歲,平均年齡52歲。分別來自內蒙、山西、湖南、河北等省煤礦以及水泥、陶瓷、耐火材料廠的工人(煤礦井下作業(yè)工人45例、其他作業(yè)工人14例)。其中Ⅰ期(煤)矽肺22例、Ⅱ期(煤)矽肺8例、Ⅲ期(煤)矽肺7例,(煤)矽塵性反應22例。最短接塵史7年,最長為46年,平均22年。13例對照組選取外科手術切除肺組織標本(均為年齡相近無接塵史的臨床患者)。2 HE染色、Masson染色觀察病理形態(tài)變化。免疫組織化學染色法用以檢測肺組織中α-SMA、vimentin和α-Ac-Tub的表達情況。免疫熒光法檢測α-Ac-Tub和vimentin以及α-Ac-Tub和SP-A的共定位表達情況。結果:1在人體(煤)矽肺標本中,能夠較好的觀察到矽肺病變發(fā)生演變的過程。既吞噬粉塵的巨噬細胞性肺泡炎---細胞性結節(jié)---細胞纖維性結節(jié)---纖維性結節(jié)(包括玻璃樣變性的結節(jié))。2α-SMA陽性標記的肌成纖維細胞定位分布于結節(jié)性病灶和彌漫性間質纖維化區(qū)域。3α-Ac-Tub可表達于正常肺組織的多種細胞(包括支氣管上皮細胞、血管內皮細胞、肺泡上皮細胞和肺成纖維細胞等)。在人體(煤)矽肺標本中于病變區(qū)(結節(jié)性病灶和彌漫性間質纖維化區(qū)域)缺失表達。4免疫熒光結果顯示在人體矽肺標本中有α-Ac-Tub和vimentin、α-Ac-Tub和SP-A陽性共定位表達的細胞,其中vimentin在病變纖維化區(qū)域的表達明顯增強,而α-Ac-Tub和SP-A在病變的結節(jié)病灶和間質纖維化區(qū)域缺失表達。第二部分ac-sdkp靶向調節(jié)α-ac-tub的表達對抑制大鼠矽肺纖維化的調控作用目的:采用支氣管灌注sio2構建矽肺大鼠模型,并予以ac-sdkp抗纖維化治療和預防治療。通過對α-ac-tub、hdac6和α-sma在矽肺大鼠肺組織中的定位、分布與表達的觀察與分析,研究與探討α-ac-tub在矽肺發(fā)生過程中的作用,以及ac-sdkp對α-ac-tub調節(jié)在抑制矽肺纖維化形成時的作用與機制。方法:1采用非暴露式一次性灌注sio2構建矽肺大鼠模型。實驗分組為:1)對照4w組:在腹腔內埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內灌注1ml生理鹽水,飼養(yǎng)4w后處理動物;2)對照8w組:腹腔內埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內灌注1ml生理鹽水,飼養(yǎng)8w后處理動物;3)矽肺模型4w組:在腹腔內埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內灌注含有50mgsio2的1ml生理鹽水,飼養(yǎng)4w后處理動物;4)矽肺模型8w組:在腹腔內埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內灌注含有50mgsio2的1ml生理鹽水,飼養(yǎng)8w后處理動物;5)ac-sdkp抗纖維化治療組:支氣管內灌注含有50mgsio2的1ml生理鹽水,在腹腔內埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,4w后更換為含有800μg/kg/dac-sdkp的2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,持續(xù)至8w后處理;6)ac-sdkp預防治療組:灌塵前48h腹腔內埋入含有800μg/kg/dac-sdkp的2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內灌注含有50mgsio2的1ml生理鹽水,持續(xù)至8w后處理。2he染色觀察肺組織病理形態(tài);免疫組織化學染色檢測α-ac-tub、α-sma、hdac6在肺組織中的定位、分布與表達。免疫熒光法檢測α-ac-tub和α-tub、α-ac-tub和sp-a、α-ac-tub和vimentin、hdac6和α-ac-tub、hdac6和α-sma的共表達。免疫印跡法(westernblot)檢測α-sma、α-ac-tub、hdac6和i型膠原的表達水平。結果:1he染色結果顯示,對照4w組和8w組大鼠雙側肺組織結構清晰,未見明顯異常。矽肺模型4w組可見肺泡壁增寬,多伴有巨噬細胞和炎細胞的浸潤,可見細胞性矽結節(jié)的形成;矽肺模型8w組多見矽結節(jié)的融合,伴有間質肺纖維化的形成。無論是ac-sdkp抗纖維化治療組還是預防治療組,其矽結節(jié)的面積較矽肺模型8w組顯著減小,肺組織內纖維化程度明顯降低。2免疫組織化學染色結果顯示,α-ac-tub除可強表達于支氣管上皮細胞外,還可在肺泡壁上的肺泡Ⅱ型上皮細胞、成纖維細胞和內皮細胞中陽性表達,使用不同公司商品化抗體均獲得一致的結果。免疫熒光結果顯示α-ac-tub存在和sp-a以及vimentin陽性共表達細胞。3免疫組織化學染色結果顯示,在對照組中,α-sma僅陽性表達于氣管、血管的平滑肌細胞,而在矽肺模型組中,α-sma可強表達于矽結節(jié)和間質纖維化區(qū)。而α-ac-tub除可陽性表達于支氣管纖毛上皮細胞,而在肺泡壁上多種細胞中陽性表達;在矽肺模型組中,α-ac-tub在矽結節(jié)和間質纖維化區(qū)域中缺失表達,尚在矽結節(jié)周圍較為正常肺泡壁中仍存在明顯的陽性表達。免疫印跡(westernblot)結果顯示,與對照組相比,矽肺模型組的i型膠原、α-sma表達水平上調,而α-ac-tub的表達下調;給予ac-sdkp抗纖維化治療組或預防治療后,能夠顯著上調α-ac-tub的表達,同時下調i型膠原和α-sma蛋白水平。4免疫組織化學染色結果顯示,hdac6在正常對照組中可陽性表達于支氣管上皮細胞(胞漿表達)和部分肺泡Ⅱ型上皮細胞(核表達)中,而在模型組中多表達于巨噬細胞和間質纖維化區(qū)域(胞漿表達)。免疫熒光檢測結果顯示,hdac6與α-sma多高表達于矽結節(jié)區(qū)域,而α-ac-tub陽性表達多位于矽結節(jié)邊緣以及較為正常的肺泡壁上。免疫印跡(westernblot)結果顯示,與對照組相比,模型組hdac6的表達顯著上調,而給予ac-sdkp抗纖維化治療和預防治療均能夠顯著抑制hdac6的表達。第三部分ac-sdkp對α-ac-tub的調節(jié)抑制angⅡ介導的肌成纖維細胞分化的作用及其機制目的:原代培養(yǎng)的大鼠肺成纖維細胞,并予以angⅡ誘導分化為肌成纖維細胞。給予ac-sdkp、at1抑制劑valsartan、hdac6特異性抑制劑tcshdac620b和rock信號抑制劑y-27632預處理,觀察ac-sdkp是否可通過對at1、rock信號通路的調節(jié)而抑制hdac6的表達,進而穩(wěn)定α-ac-tub,發(fā)揮其抑制肌成纖維細胞分化的作用。方法:將原代培養(yǎng)大鼠肺成纖維細胞分組為:1)對照組;2)angⅡ誘導組;3)AngⅡ+Ac-SDKP組;4)AngⅡ+valsartan組;5)AngⅡ+TCS HDAC6 20b組;6)AngⅡ+Y-27632組。結果:1免疫熒光結果顯示,AngⅡ誘導后,α-Tub熒光強度并無明顯變化,而α-Ac-Tub熒光強度顯著降低。2免疫熒光結果顯示,與對照組相比,AngⅡ能夠顯著誘導肺成纖維細胞向肌成纖維細胞分化,胞漿內出現(xiàn)大量交叉和平行排列的肌絲樣α-SMA蛋白在胞漿內呈現(xiàn)少量綠色的微弱熒光表達,α-Ac-Tub蛋白在胞漿以細胞核為中心呈現(xiàn)出放射狀細絲樣紅色熒光表達;AngⅡ顯著促進α-SMA的表達,胞漿內α-SMA呈現(xiàn)為或交叉或平行的肌絲樣結構,而標記α-Ac-Tub的熒光明顯減弱。予以Ac-SDKP、valsartan、TCS HDAC620b以及Y-27632預處理,較于AngⅡ誘導組比較,能夠顯著減弱α-SMA的熒光強度,而增加α-Ac-Tub熒光表達。免疫印跡(western blot)結果顯示:與對照組相比,AngⅡ組的Ⅰ型膠原和α-SMA表達水平顯著上調,而α-Ac-Tub的表達下調;予以Ac-SDKP、valsartan、TCS HDAC620b以及Y-27632預處理能夠顯著抑制AngⅡ誘導的相應蛋白變化。3免疫印跡法結果顯示,與對照組相比,AngⅡ能夠顯著上調HDAC6的蛋白表達水平,而予以Ac-SDKP、valsartan、TCS HDAC620b以及Y-27632預處理,均能夠顯著抑制HDAC6蛋白水平表達的上調。結論:1α-Ac-Tub蛋白表達下調參與了矽肺纖維化發(fā)生、發(fā)展的調控。2 Ac-SDKP能夠通過AT1、HDAC6和ROCK信號的調節(jié),穩(wěn)定α-Ac-Tub蛋白的表達,從而發(fā)揮抗矽肺纖維化的作用。
【關鍵詞】：N-乙�；�-絲氨酰-天冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸 矽肺 肌成纖維細胞 微管蛋白 乙�；�
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R135.2
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-14
• 英文縮寫14-15
• 引言15-18
• 第一部分 α-Ac-Tub在人體（煤）矽肺標本中的表達及其病理學意義18-43
• 前言18-20
• 材料與方法20-23
• 結果23-25
• 附圖25-36
• 討論36-39
• 小結39-40
• 參考文獻40-43
• 第二部分 Ac-SDKP靶向調節(jié) α-Ac-Tub的表達對抑制大鼠矽肺纖維化的調控作用43-71
• 前言43-44
• 材料與方法44-49
• 結果49-51
• 附圖51-61
• 附表61-62
• 討論62-67
• 小結67-68
• 參考文獻68-71
• 第三部分 Ac-SDKP對 α-Ac-Tub的調節(jié)抑制AngⅡ介導的肌成纖維細胞分化的作用及其機制71-92
• 前言71-72
• 材料與方法72-77
• 結果77-79
• 附圖79-82
• 附表82-83
• 討論83-87
• 小結87-88
• 參考文獻88-92
• 結論92-93
• 綜述一 腎素-血管緊張素系統(tǒng)與器官纖維化93-106
• 參考文獻101-106
• 綜述二 微管蛋白的乙�；揎椗c器官纖維化106-120
• 參考文獻115-120
• 致謝120-122
• 個人簡歷122-124

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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本文編號：542939