本文關鍵詞：肺炎支原體感染的臨床治療分析及免疫學致病機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae, MP)是人類支原體性肺炎的病原菌,近年來其感染表現為肺外并發(fā)癥多樣,難治性肺炎病例增多,其具體致病機制目前尚不明確。臨床治療MP感染的首選藥物是大環(huán)內酯類抗生素,然而MP23SrRNA基因突變會導致大環(huán)內酯類抗生素耐藥,國內外報道,MP耐藥基因突變株不斷增多,我國北京地區(qū)MP耐藥基因檢出率甚至高達90%。然而體外藥物敏感性試驗的結果不能代表藥物體內真實的治療效果,而且由于肺炎支原體分離培養(yǎng)困難,目前MP對大環(huán)內酯類藥物的體外敏感性試驗并不是臨床常規(guī)檢測項目。學者們建立了各種耐藥基因突變檢測方法,希望可以應用于臨床肺炎支原體耐藥性檢測。本實驗旨在通過分析大環(huán)內酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的臨床治療效果,評價進行MP耐藥基因檢測的臨床意義,并通過MP感染的大鼠模型探討MP致病的免疫學機制,以期為臨床治療肺炎支原體感染提供依據。 方法 1.MP感染的臨床治療分析。選取符合納入條件的66例疑為支原體肺炎的住院患者,男33例,女33例,采集患者肺泡灌洗液、痰及咽拭子標本,PCR方法進行MP DNA檢測及包含有突變位點的933bp片段擴增,擴增片段進行核酸序列測定。結合病歷資料,選擇病人發(fā)熱天數、住院天數、使用激素及并發(fā)癥出現情況做為分析指標,對耐藥基因突變株與非突變株進行比較,分析大環(huán)內酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的臨床治療效果。 2.MP免疫學致病機制研究。45只大鼠隨機分為感染組25只,對照組20只,感染組在無菌操作臺經鼻連續(xù)4天接種100μ1 (106CFU/ml)MP,對照組同樣條件下經鼻連續(xù)4天接種100μ1MP液體培養(yǎng)基。接種完成后1、3、5、8、10天時,分批處死感染組和對照組大鼠,采集肺泡灌洗液和肺組織。采用熒光定量PCR方法測定大鼠肺泡灌洗液中MP DNA含量,ELISA方法檢測肺泡灌洗液Th1/Th2類細胞因子,對大鼠肺組織標本進行HE染色后進行肺組織病理學評分。分析大鼠感染MP后肺泡灌洗液中Th1、Th2類細胞因子的動態(tài)變化,研究MP感染與機體免疫系統(tǒng)間的相互作用,了解其致病機制。 結果 1.66例病人中46例病人MPDNA陽性,20例為陰性,肺泡灌洗液、痰液、咽拭子MP分離率分別為69.7%、18.2%、6.1%,肺泡灌洗液分離率高于痰液和咽拭子(P0.01)；46份MPDNA樣品中有31份存在耐藥基因突變,突變率為67.4%(31/46),均為2063A→G突變,并未發(fā)現其它位點突變；耐藥基因突變株(macrolide-resistant, MR)與非突變株(macrolide-susceptible, MS)病人的發(fā)熱天數、住院天數、激素使用及并發(fā)癥出現情況均無統(tǒng)計學差異(P值分別為0.459、0.632、0.793、0.575)。 2.感染組大鼠造模后第三天炎癥達到最重,肺組織病理評分為14.7(最高分為16分),第五天炎癥評分有所下降,病理評分為9.7分,對照組無明顯病理改變,感染組熒光定量PCR在整個過程中均能檢測到MP,且MPDNA含量相對穩(wěn)定,天間相比并無統(tǒng)計學差異;大鼠Thl類細胞因子IFN-γ在感染MP后升高,第3天達到峰值,且IFN-γ的水平與肺組織病理學評分呈正相關(R=0.900,P0.05),而Th2細胞因子IL-4在感染后并無明顯變化。 結論 本研究結果表明：MP大環(huán)內酯類耐藥基因突變檢出率為63.4%,均為2063A→G突變；MP耐藥基因突變株與非突變株病人在發(fā)熱天數、住院天數、激素使用情況及并發(fā)癥情況上均無差別,大環(huán)內酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的治療效果可能與其抑制細菌蛋白合成外的免疫調節(jié)活性有關,因此建議臨床不必常規(guī)開展MP耐藥基因檢測；MP耐藥不導致患者病程延長及并發(fā)癥增多,因此推測本身攜帶耐藥基因可能不是導致難治性MP肺炎的主要原因,具體機制還有待于進一步研究；MP感染大鼠后促進炎癥的Thl類細胞因子升高,且其濃度與肺組織病理評分具有相關性,而起抗炎作用的Th2類細胞因子并無明顯變化,大鼠Thl/Th2類細胞因子表達失衡,這初步揭示了MP致病的免疫學機制,也提示我們對于MP感染的治療,可以從其致病的免疫學機制方面入手,采用一些免疫調節(jié)劑進行治療。
【關鍵詞】：肺炎支原體 大環(huán)內酯類抗生素 耐藥基因 細胞因子
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R563.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-17
• 研究現狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-17
• 一、肺炎支原體感染的臨床治療分析17-26
• 1.1 對象和方法17-22
• 1.1.1 研究對象17-18
• 1.1.2 試劑與儀器18
• 1.1.2.1 材料與試劑18
• 1.1.2.2 實驗儀器與設備18
• 1.1.3 方法18-22
• 1.1.3.1 標本采集18-19
• 1.1.3.2 標準菌株及臨床標本中DNA的提取19-20
• 1.1.3.3 PCR反應20
• 1.1.3.4 PCR擴增產物凝膠電泳分析20-21
• 1.1.3.5 PCR產物測序21
• 1.1.3.6 治療效果分析指標21-22
• 1.1.4 統(tǒng)計學處理22
• 1.2 結果22-23
• 1.2.1 MP確證PCR結果22
• 1.2.2 耐藥基因檢測結果22-23
• 1.2.3 MR病人與MS病人治療效果評價結果23
• 1.3 討論23-26
• 二、肺炎支原體致病免疫機制研究26-35
• 2.1 對象和方法26-31
• 2.1.1 試劑與儀器26-27
• 2.1.2 方法27-31
• 2.1.2.1 MP復蘇培養(yǎng)及濃度測定27
• 2.1.2.2 實驗動物及接種27
• 2.1.2.3 標本采集27-28
• 2.1.2.4 肺組織病理學評分28-29
• 2.1.2.5 肺泡灌洗液實時熒光定量PCR29-30
• 2.1.2.6 肺泡灌洗液IL-4、IFN-γ測定30-31
• 2.2 結果31-33
• 2.2.1 病理結果31
• 2.2.2 TH1/TH2細胞因子結果31-33
• 2.3 討論33-35
• 結論35-36
• 參考文獻36-40
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明40-41
• 附錄41-44
• 綜述 肺炎支原體感染及耐藥研究進展44-60
• 綜述參考文獻56-60
• 致謝60

【引證文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 鞠麗麗;任歡;齊穎;顏廷宇;崔志剛;;肺炎支原體感染的研究進展[J];現代生物醫(yī)學進展;2013年26期

  本文關鍵詞：肺炎支原體感染的臨床治療分析及免疫學致病機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：414747