特發(fā)性肺纖維化是一種慢性且不可逆的致命性肺部疾病。IPF的主要病理特征為纖維灶的形成,細(xì)胞外基質(zhì)沉積以及肺泡結(jié)構(gòu)破壞,導(dǎo)致病人呼吸衰竭死亡。IPF多發(fā)于中老年群體中,預(yù)后差,患者的五年生存率低于30%,生存期中位數(shù)只有三年。因?yàn)椴∫虿幻?所以缺乏針對(duì)IPF的有效治療手段,關(guān)于IPF發(fā)病機(jī)制的研究一直是基礎(chǔ)研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。因此,探究IPF的發(fā)病機(jī)制具有重要的意義。普遍認(rèn)為,肺纖維化是由異常的損傷修復(fù)造成的,巨噬細(xì)胞作為一種可塑性極強(qiáng)的免疫細(xì)胞,可以通過(guò)自身活化在肺纖維化發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在不同的刺激下,巨噬細(xì)胞可以活化成為兩種亞型,即經(jīng)典活化型(Classically activated macrophage,M1)和替代活化型(Alternatively activated macrophage,M2),M1型的巨噬細(xì)胞自身可以分泌各種炎癥因子,包括TNFα,IL-1β,IL-6等加劇炎性環(huán)境,M2型的巨噬細(xì)胞能夠抑制炎癥反應(yīng),促進(jìn)成纖維細(xì)胞分化為肌成纖維細(xì)胞,促進(jìn)組織的修復(fù)過(guò)程。Neddylation是一類新型蛋白質(zhì)翻譯后修飾,是由多種蛋白質(zhì)大分子構(gòu)成的具有高維度的、復(fù)雜的蛋...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
1. 引言
2. 材料和試劑
    2.1 主要儀器
    2.2 主要試劑耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)室用小鼠,細(xì)胞和質(zhì)粒
    2.4 試劑配置
3. 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 小鼠基因型鑒定
    3.2 質(zhì)粒提取
    3.3 免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot)
    3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qPCR)
    3.5 小鼠肺纖維化模型建立
    3.6 小鼠幾丁質(zhì)模型建立
    3.7 提取并誘導(dǎo)小鼠骨髓巨噬細(xì)胞(BMDM)
    3.8 流式細(xì)胞術(shù)
    3.9 細(xì)菌吞噬實(shí)驗(yàn)
    3.10 細(xì)胞免疫熒光
    3.11 免疫共沉淀
    3.12 組織切片HE染色
    3.13 免疫組化染色
    3.14 BCA法測(cè)蛋白濃度
    3.15 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
    3.16 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 Ubc12在IPF肺組織中高表達(dá)
    4.2 Neddylation參與巨噬細(xì)胞M2活化過(guò)程
    4.3 巨噬細(xì)胞Ubc12敲除小鼠構(gòu)建成功
    4.4 巨噬細(xì)胞中Ubc12敲除促進(jìn)幾丁質(zhì)誘導(dǎo)的M2活化
    4.5 Ubc12敲除對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬能力沒(méi)有顯著影響
    4.6 Ubc12敲除加重博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺纖維化
    4.7 Ubc12參與調(diào)控IL-4介導(dǎo)的AKT信號(hào)通路
    4.8 SHP2和Nedd8,Cul1存在相互作用
5. 討論
6. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3929317