目的1探討共培養(yǎng)條件下轉(zhuǎn)染miRNA-101的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(Alveolar macrophages of rats,AMs)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否具有保護(hù)作用。2通過(guò)檢測(cè)AM內(nèi)ERS相關(guān)標(biāo)志物的變化,探討轉(zhuǎn)染miRNA-101的BMSCs發(fā)揮作用的可能機(jī)制。方法實(shí)驗(yàn)分組及模型制備:選取4周齡左右的SPF級(jí)雄性SD大鼠全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)SD大鼠BMSCs至第三代。使用CD90、CD106、CD45抗體經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)BMSCs進(jìn)行鑒定,構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)miRNA-101的BMSCs,CCK-8檢測(cè)BMSCs,轉(zhuǎn)染miRNA-101的BMSCs,轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的BMSCs的細(xì)胞活性;與經(jīng)過(guò)Si O2刺激的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞株NR8383細(xì)胞構(gòu)建transwell共培養(yǎng)體系,上室培養(yǎng)NR8383細(xì)胞,下室培養(yǎng)BMSCs,中間隔有通透性的聚碳酸酯膜,孔徑為0.4μm;實(shí)驗(yàn)分為5組。對(duì)照組:NR8383細(xì)胞完全培養(yǎng);模型組:NR8383+Si O2(50μg/ml);BMSCs干預(yù)組BMSCs+(NR8383+Si O2)共培養(yǎng)組;miRNA-101組:過(guò)表達(dá)miRNA-101的BMSCs+...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1倒置相差顯微鏡下觀察BMSCs形態(tài)×200

華北理工大學(xué)碩士學(xué)位論文-14-設(shè)置酶標(biāo)儀參數(shù)（測(cè)定波長(zhǎng)為450nm，參比波長(zhǎng)為650nm），利用酶標(biāo)儀測(cè)量各組的OD值。2）Westernblot的測(cè)定及結(jié)果判定利用imagelab分析蛋白條帶的光密度值，計(jì)算各組目的蛋白與內(nèi)參的比值，進(jìn)行后續(xù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理建立EX....

圖2倒置相差顯微鏡下觀察NR8383細(xì)胞形態(tài)A×100,B×200

第1章實(shí)驗(yàn)研究-15-細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)。鏡下觀察見(jiàn)多為扁圓形或偶爾類似偽足樣的細(xì)胞形態(tài)（圖2）。1.2.3BMSCs表型鑒定結(jié)果流式細(xì)胞檢測(cè)第三代BMSCs表型鑒定結(jié)果顯示，CD106，CD90，陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)占比分別為94.45%，99.26%；CD45陽(yáng)性細(xì)胞占17.50%，符....

圖3流式細(xì)胞術(shù)對(duì)P3代BMSCs的表型鑒定

第1章實(shí)驗(yàn)研究-15-細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)。鏡下觀察見(jiàn)多為扁圓形或偶爾類似偽足樣的細(xì)胞形態(tài)（圖2）。1.2.3BMSCs表型鑒定結(jié)果流式細(xì)胞檢測(cè)第三代BMSCs表型鑒定結(jié)果顯示，CD106，CD90，陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)占比分別為94.45%，99.26%；CD45陽(yáng)性細(xì)胞占17.50%，符....

圖4熒光顯微鏡下觀察miRNA-101慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs結(jié)果×40

華北理工大學(xué)碩士學(xué)位論文-16-時(shí)間逐漸增加，并在72小時(shí)左右達(dá)到高峰。當(dāng)MOI=5pfu/細(xì)胞時(shí)，可獲得最佳熒光強(qiáng)度和最高轉(zhuǎn)染效率。BMSC生長(zhǎng)良好，無(wú)明顯死亡，表明轉(zhuǎn)染滴度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖影響很校慢病毒轉(zhuǎn)染72小時(shí)后，慢病毒的轉(zhuǎn)染效率達(dá)到約95％，滿足了本實(shí)驗(yàn)的需要（圖4）。....

本文編號(hào)：3919503