背景及目的慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞(AM)吞噬功能低下與AM細(xì)胞骨架的異常重排關(guān)系密切;肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白(Arp)2/3復(fù)合體可正性調(diào)節(jié)F-肌動(dòng)蛋白導(dǎo)致細(xì)胞骨架重排,但慢阻肺AM吞噬功能低下與Arp2/3復(fù)合體調(diào)控F-肌動(dòng)蛋白影響細(xì)胞骨架排列的研究較少,故本研究探討在慢阻肺小鼠AM中,Arp2/3復(fù)合體在吞噬功能中的作用。方法采用單純香煙煙霧暴露法建立慢阻肺模型,20只8周齡的SPF級BALB/c雄性小鼠進(jìn)行模型建立,20只同樣條件的小鼠為健康對照組,模型建成后采用EMMS動(dòng)物肺功能儀測定其肺功能;處死小鼠,觀察肺組織形態(tài)變化;分離AM,并將其分為健康對照組、慢阻肺組、健康CK666組、慢阻肺CK666組。噻唑蘭比色法(MTT)測定CK666作用的最適濃度和時(shí)間,向健康CK666組和慢阻肺CK666組AM中加入10μmol/L CK666培養(yǎng)24 h;流式細(xì)胞術(shù)測AM吞噬異硫氰酸熒光素標(biāo)記的大腸桿菌(FITC-E.coli)的能力;蛋白印跡法測定AM Arp2及F-肌動(dòng)蛋白的表達(dá);激光共聚焦顯微鏡測AM Arp2、F-肌動(dòng)蛋白、吞噬的FITC-E.coli平均光密度及...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1香煙煙霧暴露建立慢阻肺模型（A：早期B：晚期）

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合體在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能低下中的作用2實(shí)驗(yàn)方法2.1慢阻肺造模2.1.1單純香煙煙霧暴露法建立慢阻肺小鼠模型沿用本團(tuán)隊(duì)建模方法建立慢阻肺小鼠模型[64]。將4只蘭州牌香煙置于50cm30cm35....

圖2蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

的細(xì)胞進(jìn)行離心，洗滌一次；00μl的細(xì)胞裂解液，冰上裂解約30min；用移液器將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至無菌EP管中，低度；煮沸變性后，在-20℃下儲存。蛋白濃度工作液：根據(jù)試劑盒說明配制，置于室溫備用白樣品；樣品加20μl到96孔板中；作液，培養(yǎng)30min后....

圖3灌膠板2.6.4電泳

肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合體在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞夾子將厚薄玻璃板固定在灌膠板上，用加樣槍向兩觀察10min，如果沒有泄漏，沿一側(cè)緩慢倒出蒸餾水余水分；加入10%分離膠,再用三蒸水液封，待分離膠凝固后齒梳，待其凝固，密封保存。

圖4電泳2.6.5轉(zhuǎn)膜

圖3灌膠板膠上的梳子，將其放入電泳槽中，拔掉梳子，上樣，換用恒壓（120V）電泳1h。

本文編號：3898186