目的:基于PI-3k/Akt信號(hào)通路,探究人參皂苷Rg1(GinsenosideRg1)對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5的干預(yù)作用,從細(xì)胞層面、信號(hào)通路層面研究其對(duì)纖維化的作用機(jī)制,從而促進(jìn)間質(zhì)性肺疾病(ILD)的治療進(jìn)展,降低病死率,幫助減輕病患痛苦及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。方法:依據(jù)課題設(shè)計(jì)思路及方案,研究對(duì)象為人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5,試驗(yàn)藥物為人參皂苷Rg1,過氧化氫誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞氧化損傷模型建立,實(shí)驗(yàn)共分6組進(jìn)行。1.構(gòu)建人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5細(xì)胞的氧化應(yīng)激模型及選擇人參皂苷Rg1的最佳作用濃度。在構(gòu)建氧化應(yīng)激模型時(shí),選用目前常用實(shí)驗(yàn)試劑過氧化氫(H2O2)作用于試驗(yàn)細(xì)胞人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5,誘導(dǎo)其出現(xiàn)氧化應(yīng)激。依據(jù)作用于細(xì)胞的H2O2濃度不同而進(jìn)行分組,并在藥物作用24h后觀察各組的氧化、抗氧化指標(biāo)的變化情況。通過上述方法測(cè)得不同H2O2作用于細(xì)胞后的各項(xiàng)指標(biāo)量,結(jié)合查閱相關(guān)試驗(yàn)資料,選出H2O2的最佳作用濃度,用于試驗(yàn)中氧化應(yīng)激模型的建立。人參皂苷Rg1對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5最佳作用濃度的選擇,通過查閱資料,設(shè)定IC10為最大無(wú)毒濃度。使用6個(gè)不同濃度的人參皂苷Rg1...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
提要
abstract
引言
第一部分 實(shí)驗(yàn)研究
    一、實(shí)驗(yàn)材料
        (一)細(xì)胞
        (二)主要試劑與耗材
        (三)主要儀器與設(shè)備
        (四)實(shí)驗(yàn)藥物
    二、細(xì)胞培養(yǎng)
        (一)細(xì)胞復(fù)蘇
        (二)細(xì)胞傳代
    三、實(shí)驗(yàn)方法
        (一)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖
        (二)細(xì)胞分組
        (三)Annexin-V FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        (四)Real time PCR法檢測(cè)基因表達(dá)
        (五)Western Blotting檢測(cè)蛋白表達(dá)
        (六)免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
        (七)蛋白定量
        (八)超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、GSH及 CAT檢測(cè)
        (九)ROS檢測(cè)
    四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        (一)人參皂苷Rg1 對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5 增殖的影響
        (二)熒光染色法檢測(cè)人參皂苷Rg1 對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5 細(xì)胞外膠原的影響
        (三)人參皂苷Rg1 對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5 氧化應(yīng)激的影響
        (四)RT-PCR檢測(cè)AKT、PI-3K值
        (五)Western blot 檢測(cè)各組 AKT、P-AKT、PI-3K 的表達(dá)水平
    六、實(shí)驗(yàn)小結(jié)
第二部分 討論
    一、肺纖維化及其與氧化應(yīng)激的關(guān)系概述
        (一)、肺纖維化概述
        (二)、氧化應(yīng)激及抗氧化系統(tǒng)概述
    二、中醫(yī)對(duì)肺纖維化的認(rèn)識(shí)及治療
        (一)病因病機(jī)
        (二)中醫(yī)對(duì)肺纖維化的治療
        (三)中醫(yī)治療肺纖維化的優(yōu)勢(shì)
    三、PI-3k/Akt信號(hào)通路與肺纖維化
    四、人參皂苷Rg1的現(xiàn)代藥理作用及臨床應(yīng)用
        (一)抗氧化作用
        (二)抗炎作用
        (三)抗纖維化作用
        (四)抗疲勞作用
        (五)抗腫瘤作用
結(jié)語(yǔ)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
附件



本文編號(hào)：3876194