COPD患者血清和SB203580對LPS刺激小鼠肺泡巨噬細胞分泌RANTES、IL-10的影響
發(fā)布時間:2017-05-14 03:01
本文關鍵詞:COPD患者血清和SB203580對LPS刺激小鼠肺泡巨噬細胞分泌RANTES、IL-10的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:目的:慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種慢性氣道炎癥性疾病,以氣流受限、反復咳嗽、咳痰、氣促和呼吸困難為主要特征,且其氣流受限不完全可逆并呈進行性發(fā)展,其發(fā)病過程中活化的炎癥細胞釋放多種介質,是由于感染、免疫、中毒等因素引起肺部和各級支氣管內(nèi)炎性細胞的浸潤,包括巨噬細胞和中性粒細胞等,這些炎性細胞均能夠釋放炎癥介質導致瀑布級聯(lián),從而促使肺部炎性介質和抗炎介質失衡引發(fā)肺部疾病。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)能夠刺激機體中性粒細胞、巨噬細胞等釋放大量炎性介質,從而促進COPD等炎癥性肺。╥nflammatory lung disease, ILD)的發(fā)生。肺泡巨噬細胞(alveolar macrophages,AMs)是LPS引起COPD等ILD發(fā)生主要效應細胞,是肺第一道防線,它能夠釋放多種炎癥因子從而使炎性介質、抗炎介質失衡誘發(fā)肺部炎癥。抑制絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號轉導通路可以減少促炎因子的釋放。參與其中的這些細胞因子可能成為COPD治療的新靶點。在本實驗中我們以小鼠肺泡巨噬細胞株(MH-S)為研究對象,觀察COPD患者血清與p38MAPK抑制劑SB203580對LPS誘導上述細胞分泌RANTES和IL-10的影響,并進一步探討RANTES的表達,為將p38MAPK抑制劑應用于臨床治療COPD提供了新的理論基礎。 方法:1用ELISA法檢測細胞上清液中RANTES濃度。常規(guī)培養(yǎng)MH-S細胞株,調(diào)整細胞濃度至5×10~6/ml,將細胞置于24孔板中培養(yǎng)并過夜,隨機分組:①對照組:分別以1%、5%、10%健康人及COPD患者血清+RPMI1640及10%小牛血清+RPMI1640作為培養(yǎng)液孵育MH-S細胞;②LPS組:分別以1%、5%、10%健康人及COPD患者血清+RPMI1640及10%小牛血清+RPMI1640作為培養(yǎng)液孵育MH-S細胞6h后,應用LPS刺激,調(diào)整終濃度為100ng/ml;③LPS+SB組:分別以1%、5%、10%健康人及COPD患者血清+RPMI1640及10%小牛血清+RPMI1640作為培養(yǎng)液孵育MH-S細胞6h后,加入SB203580和LPS進行刺激,調(diào)整SB203580和LPS的終濃度分別為10μmol/L和100ng/ml,并使SB203580提前孵育20min后再加入LPS刺激。各組分別刺激6h,收集細胞上清液,凍存于-80℃冰箱,待ELISA法檢測RANTES濃度。 2用ELISA法檢測細胞上清液中的IL-10濃度,方法和分組與RANTES測定相同。 3免疫細胞化學法測定RANTES的表達變化。調(diào)整細胞濃度1×10~6/ml,于24孔板爬片過夜,仍按以上分組對MH-S細胞刺激后,用免疫細胞化學法檢測各組細胞中RANTES的表達變化。 結果:1細胞上清液中的RANTES含量變化:①LPS刺激MH-S細胞,細胞上清液中RANTES含量增加,且隨血清濃度增高而增加,且用COPD患者血清孵育的細胞上清液中RANTES含量高于健康人。與相同類型血清同一濃度對照組相比較其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。用p38MAPK抑制劑SB203580+LPS干預后,RANTES含量減少,但仍高于對照組,與相同類型血清同一濃度對照組相比較其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。相同類型血清同一濃度LPS組與LPS+SB203580組比較(P<0.05)也有統(tǒng)計學意義。②隨著COPD患者血清濃度增高,RANTES含量在control組、LPS組和LPS+SB組均呈高度正相關(r=0.966,P<0.01;r=0.974, P<0.01; r=0.945, P<0.01);隨著健康人血清濃度增高,RANTES含量在control組、LPS組和LPS+SB組亦呈高度正相關(r=0.968,P<0.01;r=0.979, P<0.01; r=0.965, P<0.01)。③COPD患者血清和LPS共同作用MH-S細胞可發(fā)揮協(xié)同作用,,進一步誘導RANTES增加,與同一血清濃度健康對照組相比較(P<0.05)差異有統(tǒng)計學意義。 2細胞上清液中的IL-10含量變化:①LPS刺激MH-S細胞,細胞上清液中IL-10含量增加,且隨血清濃度增高而增加,但用COPD患者血清孵育的細胞上清液中IL-10含量低于健康人。與相同類型血清同一濃度對照組相比較(P<0.05)其差異具有統(tǒng)計學意義。用p38MAPK抑制劑SB203580+LPS干預后,IL-10含量減少,但仍高于對照組。與相同類型血清同一濃度對照組相比較其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。相同類型血清同一濃度LPS組與LPS+SB203580組比較(P<0.05)也有統(tǒng)計學意義。②隨著COPD患者血清濃度增高,IL-10含量在control組、LPS組和LPS+SB組均呈顯著正相關(r=0.920,P<0.01; r=0.923, P<0.01; r=0.765, P<0.01);隨著健康人血清濃度增高,IL-10含量在control組、LPS組和LPS+SB組亦呈高度正相關(r=0.983,P<0.01; r=0.878, P<0.01; r=0.985, P<0.01)。③COPD患者血清與LPS對誘導IL-10分泌協(xié)同作用不明顯。 3免疫細胞化學測定RANTES的表達:對照組細胞質僅有微弱黃染;LPS刺激細胞后胞漿黃染增強;用SB203580預處理后,LPS刺激引起的胞漿黃染減弱但仍強于對照組;隨著血清濃度增高胞漿黃染增強且COPD患者較健康人及小牛血清者黃染顯著,各組與對照組比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。LPS組與LPS+SB203580組比較(P<0.05)也有統(tǒng)計學意義。 結論:1LPS可引起MH-S細胞上清液中的RANTES及IL-10分泌增加,用SB203580干預后,RANTES、IL-10分泌減少,但仍高于對照組,提示SB203580可能部分抑制RANTES及IL-10分泌。 2同一COPD患者隨著血清濃度的增加RANTES及IL-10含量均呈增高趨勢,均具有相關性,且RANTES含量高于健康人,IL-10含量低于健康人。提示COPD患者血清本身對MH-S細胞可能就是一種炎性刺激,且其對于RANTES分泌與LPS有協(xié)同作用。 3無活性RANTES存在于胞漿。LPS刺激MH-S細胞后,RANTES被激活變?yōu)橛谢钚缘腞ANTES,胞漿顯著黃染。應用SB203580干預后,胞漿黃染減弱,提示SB203580可通過p38MAPK減少其表達。
【關鍵詞】:慢性阻塞性肺疾病 p38MAPK抑制劑 小鼠肺泡巨噬細胞 信號轉導及轉錄活化子-3 RANTES 白介素-10 脂多糖
【學位授予單位】:河北醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2013
【分類號】:R563.9
【目錄】:
- 摘要4-7
- ABSTRACT7-12
- 前言12
- 材料與方法12-18
- 結果18-20
- 附圖20-27
- 附表27-28
- 討論28-31
- 結論31-32
- 參考文獻32-34
- 綜述 RANTES 和 IL-10 與慢性阻塞性肺疾病的關系34-41
- 參考文獻38-41
- 致謝41-42
- 個人簡歷42
【參考文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條
1 張國祥;許文龍;;T淋巴細胞及其分泌的細胞因子與哮喘[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2008年01期
2 張建全;鐘小寧;柳廣南;李超乾;;白細胞介素-10在慢性阻塞性肺疾病中作用探討[J];廣西醫(yī)科大學學報;2008年01期
3 陳延偉;楊炯;張濟祥;彭娟;余紅櫻;;穩(wěn)定期慢性阻塞性肺疾病外周血IL-8、IL-10與吸煙量的關系[J];武漢大學學報(醫(yī)學版);2007年06期
4 水華;丁國華;;p38信號通路對單側輸尿管結扎大鼠RANTES的影響[J];中華急診醫(yī)學雜志;2006年08期
5 王曉青;;慢性阻塞性肺疾病患者血清IL-8、IL-10、α-HBDH、CRP及NO水平的變化[J];細胞與分子免疫學雜志;2010年12期
6 曹巖;黃穎;鐘莉莉;楊春榮;李方蓮;;老年支氣管哮喘患者血清中白細胞介素及腫瘤壞死因子的檢測及意義[J];中國實驗診斷學;2009年02期
本文關鍵詞:COPD患者血清和SB203580對LPS刺激小鼠肺泡巨噬細胞分泌RANTES、IL-10的影響,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號:364116
本文鏈接:http://www.sikaile.net/yixuelunwen/huxijib/364116.html
最近更新
教材專著