目的探討銅藍(lán)蛋白（Cp）在石英誘導(dǎo)的人胚肺成纖維細(xì)胞（HELF）中JNK/ERK/AP-1信號(hào)通路改變中的作用。方法分別在100μg/ml石英作用前1 h、同時(shí)和作用后1h加入30μg/ml Cp,同時(shí)設(shè)立單獨(dú)用石英和單獨(dú)用Cp處理以及不做任何處理的細(xì)胞組,刺激細(xì)胞24 h后,用噻唑藍(lán)（MTT）比色法觀察Cp對(duì)石英誘導(dǎo)的HELF細(xì)胞增殖的影響。用100μg/ml石英分別作用于HELF細(xì)胞、轉(zhuǎn)染JNK顯性失活突變體質(zhì)粒的HELF細(xì)胞（DN-JNK）和轉(zhuǎn)染ERK顯性失活突變體質(zhì)粒的HELF細(xì)胞（DN-ERK）24 h;用100μg/ml石英作用1 h后,加入30μg/ml Cp作用24 h;同時(shí)設(shè)立不做任何處理的對(duì)照組。用MTT法檢測(cè)分別抑制JNK和ERK后對(duì)細(xì)胞增殖的影響;用蛋白免疫印跡（Western blotting）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)JNK、ERK、c-Jun、c-Fos及其磷酸化水平的改變。結(jié)果石英作用1 h后加入Cp,對(duì)石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用,后續(xù)的實(shí)驗(yàn)選擇這種作用模式。Cp可以明顯增加JNK、ERK蛋白及磷酸化ERK（pERK）、磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化c-Jun（p-... 

【文章來(lái)源】：衛(wèi)生研究. 2014,43(02)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

抑制JNK后觀察Cp對(duì)石英誘導(dǎo)的p-JNK、

第2期葉萌，等.銅藍(lán)蛋白在石英誘導(dǎo)的JNK/EＲK/AP-1信號(hào)通路改變中的作用201(1)與HELF+silica組比較，P＜0.05;(2)與HELF+silica+Cp組比較，P＜0.05圖3MTT實(shí)驗(yàn)觀察抑制JNK后Cp對(duì)HELF細(xì)胞增殖的影響Figure3TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingJNK果表明Cp可以明顯促進(jìn)石英誘導(dǎo)的EＲK蛋白、p-EＲK、p-c-Jun和p-c-Fos水平的增加。轉(zhuǎn)染DN-EＲK質(zhì)粒后，石英以及石英和Cp同時(shí)誘導(dǎo)的p-EＲK和p-c-Fos的增加被抑制，p-c-Jun蛋白水平的增加沒(méi)有被抑制(圖4)。抑制EＲK后，Cp及石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖沒(méi)有被完全抑制，但低于Cp和石英共同作用的空載體組(圖5)。說(shuō)明Cp通過(guò)上游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)EＲK蛋白及其磷酸化的增加，且通過(guò)EＲK/c-Fos通路進(jìn)一步增強(qiáng)石英的促細(xì)胞增殖作用。1:HELF;2:HELF+silica;3:HELF+silica+Cp;4:DN-EＲK;5:DN-EＲK+silica;6:DN-EＲK+silica+Cp圖4抑制EＲK后觀察Cp對(duì)石英誘導(dǎo)的p-EＲK、c-Jun、p-c-Jun、c-Fos和p-c-Fos蛋白水平的影響Figure4TheeffectsofCponthelevelsofp-EＲK，c-Jun，p-c-Jun，c-Fos和p-c-FosinducedbysilicaafterinhibitingEＲK(1)與HELF+silica+Cp比較，P＜0.05圖5MTT實(shí)驗(yàn)觀察抑制EＲK后Cp對(duì)HELF細(xì)胞增殖的影響Figure5TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingEＲK3討論塵肺病是由于長(zhǎng)期吸入石英粉塵所致的以肺部彌漫性纖維化為主的一種疾玻Cp主要是由肝臟合成和分泌的，所以本次體外實(shí)驗(yàn)采用體外給予Cp的方法。顯性失活突變體技術(shù)是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中常用的技術(shù)，主要通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性作用抑制目的蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明，100μg/ml石英處理1h后再給予30μg/mlCp，Cp對(duì)石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，這種作用與JNK/c-Jun和c-Fos及EＲK/c-Fos通路有關(guān)。

第2期葉萌，等.銅藍(lán)蛋白在石英誘導(dǎo)的JNK/EＲK/AP-1信號(hào)通路改變中的作用201(1)與HELF+silica組比較，P＜0.05;(2)與HELF+silica+Cp組比較，P＜0.05圖3MTT實(shí)驗(yàn)觀察抑制JNK后Cp對(duì)HELF細(xì)胞增殖的影響Figure3TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingJNK果表明Cp可以明顯促進(jìn)石英誘導(dǎo)的EＲK蛋白、p-EＲK、p-c-Jun和p-c-Fos水平的增加。轉(zhuǎn)染DN-EＲK質(zhì)粒后，石英以及石英和Cp同時(shí)誘導(dǎo)的p-EＲK和p-c-Fos的增加被抑制，p-c-Jun蛋白水平的增加沒(méi)有被抑制(圖4)。抑制EＲK后，Cp及石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖沒(méi)有被完全抑制，但低于Cp和石英共同作用的空載體組(圖5)。說(shuō)明Cp通過(guò)上游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)EＲK蛋白及其磷酸化的增加，且通過(guò)EＲK/c-Fos通路進(jìn)一步增強(qiáng)石英的促細(xì)胞增殖作用。1:HELF;2:HELF+silica;3:HELF+silica+Cp;4:DN-EＲK;5:DN-EＲK+silica;6:DN-EＲK+silica+Cp圖4抑制EＲK后觀察Cp對(duì)石英誘導(dǎo)的p-EＲK、c-Jun、p-c-Jun、c-Fos和p-c-Fos蛋白水平的影響Figure4TheeffectsofCponthelevelsofp-EＲK，c-Jun，p-c-Jun，c-Fos和p-c-FosinducedbysilicaafterinhibitingEＲK(1)與HELF+silica+Cp比較，P＜0.05圖5MTT實(shí)驗(yàn)觀察抑制EＲK后Cp對(duì)HELF細(xì)胞增殖的影響Figure5TheeffectsofCponHELFcellproliferationafterinhibitingEＲK3討論塵肺病是由于長(zhǎng)期吸入石英粉塵所致的以肺部彌漫性纖維化為主的一種疾玻Cp主要是由肝臟合成和分泌的，所以本次體外實(shí)驗(yàn)采用體外給予Cp的方法。顯性失活突變體技術(shù)是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中常用的技術(shù)，主要通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性作用抑制目的蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明，100μg/ml石英處理1h后再給予30μg/mlCp，Cp對(duì)石英誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，這種作用與JNK/c-Jun和c-Fos及EＲK/c-Fos通路有關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3514805